丹皮酚诱导人肝癌细胞凋亡及其机制研究-肿瘤学专业论文.docx

安徽医科大学硕士学位论文 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 7 结果: West er n- bl ot 方法及免疫细胞化学分析 COX- 2、cI AP- 1、XI AP、Sur vi vi n 变化。 1 Pae 对人肝癌细胞株 HepG2、Bel - 7402 增殖抑制作用 1. 1 Pae 对 HepG2 细胞的增殖抑制作用 采用 MTT 法，观察 Pae 对 HepG2 细胞的增殖抑制作用。结果显示（1）Pae7. 81～ 62. 5mg/ L 对 HepG2 细胞有增殖抑制作用，药物浓度越高，抑制作用越强。（2） 系列浓度 Pae 作用于肝癌细胞 HepG2 24h、48h 及 72h 后观察细胞的生长情况，结 果显示 Pae 作用时间越长，对 HepG2 细胞的抑制作用越强。 1. 2 Pae 对 Bel - 7402 细胞的增殖抑制作用 采用 MTT 法，观察 Pae 对 Bel - 7402 细胞的增殖抑制作用。结果显示（1） Pae7. 81～62. 5 mg/ L 对 Bel - 7402 细胞有增殖抑制作用，药物浓度越高，抑制作 用越强。（2）系列浓度 Pae 作用于肝癌细胞 Bel - 7402 24h、48h 及 72h 后观察细 胞的生长情况，结果显示 Pae 作用时间越长，对 Bel - 7402 细胞的抑制作用越强。 2 Pae 对人肝癌细胞株 HepG2、Bel - 7402 凋亡的影响 2. 1 Pae 对人肝癌细胞株 HepG2、Bel - 7402 凋亡的 TUNEL 分析 采用末端双脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口标记技术（ t er mi nal deoxynucl eot i dyl t r ansf er ase- medi at ed dUTP ni ck- end l abel i ng, TUNEL) 观 察 HepG2、Bel - 7402 细胞凋亡的形态学改变。典型的凋亡细胞形态特征包括核固 缩、体积缩小、核染色质边集等。研究发现对照组细胞增殖旺盛，可见少许凋亡 细胞；药物作用细胞 48h 后，细胞密度均明显减少，凋亡细胞数明显增加。 2. 2 Pae 对人肝癌细胞株 HepG2、Bel - 7402 凋亡的 FCM 检测 应用流式细胞仪（Fl ow Cyt omet r y, FCM）检测细胞凋亡率。在DNA图谱G0/ G1 期前出现了一个代表细胞凋亡的亚G1峰即凋亡峰。FCM结果显示，正常对照组可见 低矮的凋亡峰，药物处理48h后，其凋亡峰增加。Pae7. 81～62. 5 mg/ L作用HepG2 细胞株时，凋亡率分别为：（2. 3±1. 8）%、（15. 6±3. 2）%、（27. 6±3. 9）% （33. 2±2. 7）%、（45. 3±1. 7）%；Pae7. 81～62. 5 mg/ L作用Bel - 7402细胞株时， 凋亡率分别为：（1. 8 ±1. 2）%、（12. 5±3. 1）%、（25. 1±4. 2）%、（37. 5±3. 7） %、（50. 3±4. 5）%。 3 Pae 对人肝癌细胞株 HepG2、Bel - 7402 凋亡的可能分子机制 采用 West er n Bl ot 和细胞免疫组化法检测 COX- 2、Sur vi vi n、cI AP- 1、XI AP 表达情况。结果表明，药物处理后 HepG2、Bel - 7402 细胞 COX- 2、Sur vi vi n、cI AP- 1、 XI AP 表达降低。 结论 本结果表明一定浓度的 Pae 能抑制 HepG2、Bel - 7402 细胞株的增殖，并诱导 细胞凋亡，其作用机制可能与下调 COX- 2、Sur vi vi n 、cI AP- 1、XI AP 表达有关。 关键词 丹皮酚 HepG2 Bel - 7402 COX- 2 Sur vi vi n cI AP- 1、XI AP 凋亡 Effects and mechanisms of Pae on apoptosis in human hepatoma cell lines Master of Medical Science: Fan Lulu Preceptor: Prof Sun Guoping （Department of Oncology, The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University） Abst r act Background Hepatocellular carcinoma (HCC) is the third most common cancer in China where t