成肌细胞自体移植的实验研究-心血管内科学专业论文.docxVIP

? 第二军医大学 硕士学位论文 ? 英文缩写 EECchicken embryo extract E E C VR V R retrovlrus 凹G E汗IM吨MIMbasic fibroblast growth factor enhanced green 凹 G E 汗 I M 吨 M I M myocardia1 infarction 逆转录病毒 碱性成纤维细胞生长因子 增强型绿色荧光蛋白 成肌细胞移植 心肌梗死 DVG D V G R V FHC F H C - R B BPs MBP HR ? LVSP ? LVDP LVEDP dP/dtm缸 ? dP/dtmin ? ? ventricu1ar remodeling global ventricular di1atation chronic heart fai1ure diastolic blood pressure systolic blood pressure main blood pressure heart rate left ventricular systolic pressure left ventricular diastolic press旧E left ventricular end-diastolic pressure 心室重构 心窒整体扩张 充血性心力衰竭 舒张压 收缩压 平均动脉压 心率 左室收缩压 左室舒张压 左室舒张末压 左窒收缩压上升最大速度 左窒舒张压上升最大速度 ， 第二军阪大学 硕上学位论立 ? 成肌细胞自体移植的实验研究 摘要 i由于心肌细胞不能再生，使得梗死后的心肌组织只能由纤维疤痕来替代，这将会 ? 产生不同程度的心室重构，从而导致心脏舒缩功能异常和电活动紊乱。近年来，利用 细胞移植的方法重塑坏死区的心肌结构受到了广泛的关注。但由于供体的医乏及异体 移植带来的排斥反应，使移植胚胎干细胞、胚胎心肌细胞或幼体成肌细胞受到了很大 的限制J*研究旨在探索成年大鼠成肌细胞的原代培养方法:观察含有 eGFP 基因的 重组逆转录病毒载体 (RY-eGFP)体外转染成肌细胞的效果:观察成肌细胞自体移植 后在宿主体内的生长、增殖情况及对心功能的影响，为临床应用自体成肌细胞移植治 疗心肌梗死提供实验依据。 ? : 1 采用组织块培养法原代培养成年大鼠的成肌细胞。应用成肌细胞优势 促其分裂增殖:利用骨骸肌特异性标志物 myogedn 对培养细胞进行免疫组化 、 鉴定。 2. 取逆转录病毒转染细胞株 PA317/LESN 培养上清，体外感染培养的成年大 鼠成肌细胞，荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效果，并观察病毒悬液的浓度及重复 转染次数对转染效果的影响。 3 利用液氮冷冻大鼠左室游离壁，建立大鼠模拟心肌 梗死模型。将体外培养的成年大鼠成肌细胞分别移植到相应大鼠的皮下及心肌疤痕组 织中，观察成肌细胞在大鼠体内异位生长、增殖的情况，并利用 MPA-Y 多导生理仪 监测血流动力学参数，结合心脏重量指数等参数评价成肌细胞移植后对心功能的改善 程度。 结果: 1 采用组织块培养法. 1cm3 肌组织制备的成肌细胞? 2 天后即可见细胞 ;? 从肌组织块边缘爬出. 2周后细胞数量可达 7X 106 ; 在保持适当的细胞密度和培养条 件下，可连续传代 10 次以上，细胞倍增时间为 24ho 应用骨锵肌特异的抗 myogenm 单克隆抗体进行免疫组化研究，证实了培养细胞的骨锵肌起源。 2. 荧光显微镜观察 表明，逆转录病毒载体携带的 eGFP 基因可被成功地转入成肌细胞，流式细胞仪检视 ú 转染效率约为 12.82% 。在可能影响转染效率的各种因素中，病毒悬液的浓度对目的 基因的转染有显著影响;适当增加转染次数可提高转染效果。 3.6 只动物进行了成肌 ， 第二军民大学 硕 L学位论文 、 细胞的皮下自体移植，组织学检查发现其中 2 只在移植部位形成了杂乱的肌组织。在 20 只进行成肌细胞心肌内自体移植的大鼠中，有 8 只myogenin 染色阳性，证明了成 肌细胞可在宿主的心肌疤痕中存在。与对照组相比，移植组左室重量明显降低 (796 士 23 vs 837 士 38，P=0.035); 左室重量与体重之比 (LVW!BW) 明显降低( 1.94+0.06 vs 2.05 + O.饨， P=0.015); 心脏重量指数也明显降低 C 3.11 士 0.08 vs 3.23 士。 09， P=0.028); LVEDP CKPa) 也降低(3 .4土 0.3 vs 3.9 土 0.2，P=O.OO 1 );而 dP/dtmax (KPa) ? 升高 (718士 75 vs 641 + 66，P=0.048) 。