脆江蓠生理生化特性及组织培养种质保存研究-捕捞学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 脆江蓠生理生化特性及组织培养种质保存研究 摘 要 脆江蓠(Gracilaria chouae Zhang et Xia)是我国特有的大型经济红藻，已在福 建沿海开展了大规模人工栽培，具有巨大的经济价值和生态价值。但其基础生物 学研究较为欠缺，且孢子采苗困难，养殖主要依靠藻枝累代营养繁殖，不利于养 殖规模的扩大和种质资源的保存。这些问题严重制约了脆江蓠养殖业的健康持续 发展。为补充脆江蓠基础生物学研究的不足，探索经济、高效的保种和育苗的新 途径，本研究在实验室条件下对脆江蓠进行生理学实验，探究脆江蓠生长的适宜 光强和温度条件，并应用植物组织培养技术，从藻体的无菌化处理、理化条件的 优化、丝状体的诱导、保存及再分化等方面对脆江蓠无性繁殖系的诱导和育苗进 行了探索，主要研究方法及结果如下： 1.为探究脆江蓠生长的适宜光强和温度条件，设置 10、15、20、25℃4 个温 度梯度和 40、80、120、160、200 μmol·m-2·s-15 个光强梯度，对脆江蓠进行二因 素多水平室内培养实验。结果表明：温度、光强及二者交互作用均对脆江蓠的生 长产生极显著影响，温度为相对生长速率的主要影响因子。在光强 120 μmol·m-2·s-1，温度 20℃条件下，脆江蓠相对生长速率最高，达 0.038 g·g-1·d-1。光 合色素含量随温度升高而升高，随光强增大先升后降，在光强 120 μmol·m-2·s-1， 温度 25℃条件下达到最高值，藻红蛋白(PE)达 1.12 mg/g，藻蓝蛋白(PC)达 0.272 mg/g，别藻蓝蛋白(APC)达 0.216 mg/g1，叶绿素 a (Chla)达 1.82 mg/g，其中光强 对 PE、Chla 含量的影响较大，温度对 PC、APC 含量的影响较大。超氧化物歧 化酶（SOD)含量随温度的降低和光强的升高而升高，主要受光照强度影响。在 各温度条件下，120~200 μmol·m-2·s-1 光强组 SOD 含量较高，均达到 800 U/g 左右 的较高水平。丙二醛（MDA）含量随温度和光强的上升均呈先上升后下降的趋 势，主要受温度影响。25℃、200 μmol·m-2·s-1 处理组 MDA 含量最高，达 211.85 mg/gFW。综上，脆江蓠生长最适条件为光强 120 μmol·m-2·s-1，温度 20℃；在 25℃ 高温下脆江蓠细胞受害程度较高，在 40~120 μmol·m-2·s-1 光强范围内，提高光照 强度可提高脆江蓠的抗逆性。 1 2.为诱导脆江蓠产生丝状体，并找到适宜的脆江蓠组织块除菌方法及丝状体 诱导的适宜条件，本实验设置了不同的灭菌方法、外植体长度、光强、温度、培 养基及生长调节剂等条件，对脆江蓠藻段进行组织培养，结果表明：最佳灭菌方 法是将脆江蓠藻体用无菌海水冲洗干净，在 20℃下超声清洗 15 min，放入 1%聚 维酮碘溶液中浸泡 5 min 后洗净藻体表面的灭菌剂，在含抗生素的 f/2 培养基中 培养 24 h，该处理在有效除菌的同时，可最大程度的减轻对外植体的伤害，提高 成活率；组织培养适宜的藻段长度为 10 mm，该长度的外植体成活率达到 100%， 98%的外植体产生不定芽，平均出芽数为 3.29±1.67 个/cm；适宜的光温条件为， 温度 20~25℃、光强 40~120 μmol·m-2·s-1，该条件下愈伤组织诱导率均达 70%以 上，不定芽产生率达 95%以上；在培养基中添加 0.5 mg/L 1-萘乙酸对丝状体的 诱导和不定芽产生均有明显效果，75%以上的外植体产生丝状体，而对照组无丝 状体的产生，添加 1-萘乙酸组的外植体不定芽的芽长也显著高于对照组。 3.分别采用液体培养基和固-液结合培养基对脆江蓠丝状体进行培养，并设置 不同温度、光强条件，观察其生长情况。结果表明：脆江蓠丝状体与外植体分离 后，在液体培养基中悬浮培养仍可保持快速营养生长，生长的适宜温度为 20~25℃，适宜光强为 80~120 μmol·m-2·s-1，最大相对生长速率达到 0.10 g.g-1. d-1。 4.将脆江蓠丝状体片段静置培养，与附着基接触的丝状体可自行固着并再分 化为盘状体，经过 40 天室内培养，再生出脆江蓠幼苗。 关键词：脆江蓠；生长；组织培养；丝状体；育苗 2 Studies on the Physiological and Biochemical Character and Tissue Culture for Seed Stock of Gracilaria chouae Abstract Tissue culture for seed stock was studied on marine macroalgae Graci