RAD001对PIK3CA基因及KRAS基因不同类型人肺NSCLC细胞放射增敏作用分析.doc

- -- 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 RAD001 对 PIK3CA 基因及 KRAS 基因不同类型人肺 NSCLC 细胞放射增敏作用研究 学 位 申 请 人 ： 陈 豫 指 导 教 师 ： 于世英 教授 摘 要 目的：探讨 mTOR 蛋白抑制剂 RAD001 在 NSCLC 放疗中的作用，研究其放射增敏作 用与 PIK3CA 基因和 KRAS 基因状态的关系。 方法：体外培养 EGFR 野生型酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药的人肺非小细胞肺癌细 胞株，其中 NCI-H661 细胞为 PIK3CA 和 KRAS 基因双野生型，NCI-H460 细胞为 PIK3CA 和 KRAS 基因双突变型。应用 MTT 法分别检测 RAD001 对两株细胞的半数 抑制浓度（IC50），确定药物增敏剂量。应用 RAD001 作用 24h 后联合及单独进行 X 线 0、2、4、6、8Gy 照射，分别计算两株细胞克隆存活分数，多靶单击模型拟合生存 曲线，计算 D0、Dq、SF2 及 SER 参数。应用免疫荧光共聚焦分别观察两株细胞 RAD001 干预组及单纯照射组 X 线 4Gy 照射后 0m、30m、60m、4h、12h、24hγ-H2AX 蛋白表 达变化情况。应用 western blot 进行 p-p70S6K 及 γ-H2AX 蛋白检测及灰度值定量。 结果：MTT 法检测