《浅析脑损伤分子生物学的研究》-毕业论文（设计）.docVIP

l 浅析脑损伤分子生物学的研究 摘要：一般认为，机械性脑损伤后中心区脑细胞缺血、坏死及血管损伤可造成半暗区神经元处于水肿及低灌注状态，如果在一定时间内得不到救治也会逐渐发展为程序性坏死。脑损伤后，神经元的凋亡涉及了许多病理生理变化，了解这些变化及机制对开展脑保护的研究具有重要意义。 关 键 词：脑损伤分子；蛋白；基因；海马 脑损伤分子水平研究的不断深入为治疗开辟了新方法。一方面可以通过分子技术增加脑内神经保护因子和营养因子的表达，另一方面可以用分子手段阻止或减少内源性脑损害因子的表达，促进脑功能恢复。分子生物学技术作为一项新技术为脑损伤研究注入活力，开辟了新的研究领域。但创伤性脑损伤(TBI)后继发性神经细胞损害的分子生物学机制研究刚刚起步，尚未得出肯定结论。有关脑损伤的基因治疗仍处于动物实验研究阶段，尚未应用于临床治疗脑损伤病人。但无论如何，分子生物学技术应用于脑损伤的研究，将为阐明脑损伤发病机制和开辟脑损伤治疗途径提供有效手段。 1、TBI与即刻早期基因:TBI后兴奋性氨基酸(EAA)的释放及M型胆碱能受体激活导致细胞内Ca2+升高，进一步通过对转录因子进行磷酸化修饰以诱导神经细胞IEGS的表达。IEGs诱导晚期靶基因表达的分子机制是脑损伤分子生物学研究的热点之一价。 2、TBI一与神经营养因子:神经营养因子(NTFS)能促进外周及中枢神经元的分化、生长及存活。近来，有关生物体内内源性促进神经生长和修复再生的因子研究越来越受到重视。 3、TBI诱导HSP一72mRNA表达:应用液压脑损伤(FPI)模型的实验证明，HSP72可作为判断脑损伤部位的标志物。HSP基因是与创伤耐受性有关的基因，如果能针对性改变这些基因的表达，提高机体损伤的耐受能力，对TBI的修复及预后具有深远的意义。 4、TBI诱导IL一lβ和TNF一a表达:TBI时体循环及中枢神经系统多种细胞因子合成增加。因此，基因水平阻断在炎症反应中起重要作用的细胞因子表达，是防治继发性脑损伤的新课题。 5、bcl一2基因家庭与创伤性脑损伤:bcl一2基因家庭是一个非常复杂的相互作用体系。Bax蛋白与bcl-2+bc1-x蛋白的比值决定细胞受刺激后是凋亡还是存活，bax蛋白占优势细胞凋亡，bc1+2+bcl-x蛋白占优势细胞存活。我们新近的实验发现:(l)创伤性脑损伤后、大脑皮质、白质、海马及丘脑的某些区域存在细胞凋亡。(2)分别从mRNA和蛋白水平证实:液压颅脑伤后早期，bcl-xlmRNA下调，bcl-2和bcl-x蛋白水平下降，即凋亡抑制因子的下降危及细胞生存;后期 baxmRNA上调，bax蛋白水平升高，即凋亡促进因子的上调与神经细胞凋亡有关。同时细胞凋亡是一个主动过程，人们有可能在bcl-2基因家族的网络体系中，发现某一中止细胞凋亡的关键点，为颅脑外伤的救治提供新的途径。 6、转基因技术:转基因动物是应用生物工程技术，将特定的重组外源基因导入动物的受精卵或胚胎，使其稳定地整合入动物的染色体，在动物体内得以表达并能遗传给后代动物。目前，建立转基因动物的方法主要有:显微注射法、逆转录病毒及胚胎干细胞介导法等。神经营养因子的基因转染、神经营养因子治疗脑损伤的作用己被广泛认识。外源性给予此类因子后，蛋白容易降解，且不易透过血脑屏障。此类问题可通过目的基因转染获得脑区内源性表达而得以角军决。 6.1超氧化物歧化酶 (SOD)转基因鼠Cu、Zn一SOD在循环血液中的半衰期只有6min，且不能通过血脑屏障。 6.2bcl-2转基因鼠过度表达人类bcl-2基因的转基因鼠经皮质打击伤，伤后7d动物脑组织损伤的体积明显低于非转基因鼠。伤后Zd，转基因组动物运动功能、爬坡试验优于非转基因组。表明 bcl-2蛋白对创伤性脑损伤具有神经保护作用。脑保护因子的基因转染:将转基因技术用于各种内源性保护因子的损伤区域脑细胞内的转染，使其在治疗窗内高度表达，获得治疗效果。最近Chen等研究证明，原癌基因bcl-2在轴突的生长和再生中起关键作用。无论在体或离体，bcl-2均可促进断裂轴突的再生，bcl-2可能在控制神经元轴突生长与再生中起类似开关的作用。应用基因重组腺病毒为载体将bcl-2基因转入神经细胞，可以防止细胞凋亡的发生。 6.3其他转基因鼠由于转基因技术的飞速发展和日益完善，己有多种转基因小鼠应用于脑损伤研究领域，如:代谢性谷氨酸受体基因、谷耽甘种过氧化物酶基因的各种转基因鼠。 7、基因敲除(knockout)技术:基因敲除是一种选择性破坏目的基因表达的方法，用于研究目的基因编码蛋白在脑损伤中发挥的作用。脑损伤因子的失活:基因敲除突变和寡聚核普酸法分别能在基因水平和翻译水平阻断目的基因表达。反义寡聚核普酸可直接结合于翻译起始序列下游，抑制目的基因表达。目前己建立的模型有: 7.1MnSO