人大隐静脉干细胞原代培养方法的改良.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 凌思英 等/人大隐静脉干细胞原代培养方法的改良 973 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jun. 25, 2018, 34(6): 973−982 DOI: 10.13345/j.cjb.170459 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·组织工程与细胞培养· 凌思英，张柏杨，滕勇，魏巍，喻武，孙建明，唐博，陈以宽 400010 , , , . . , 2018, 34(6): 973–982. Ling SY, Zhang BY, Teng Y, et al. An improved method for stem cell derivation from human great saphenous vein. Chin J Biotech, 2018, 34(6): 973–982. 摘 要: 旨在探讨如何高效获取优质的人大隐静脉 (Great saphenous vein) 原代干细胞。大隐静脉剪碎后分别采 用组织块贴壁法和Ⅱ型胶原酶消化法获取血管壁细胞。倒置显微镜下观察不同时间段两组血管壁细胞形态学变 化，台盼蓝染色测定血管壁细胞存活率，流式分选 CD34 和 CD117 双阳性干细胞，免疫荧光进一步证实。细胞 培养至第三代 (P3) 时组织块贴壁法提取的细胞出现纤维化老化，而酶消化法提取的细胞仍有集落样生长，细胞 存活率分别为 (91.7±1.2)% 和 (97.2±0.7)% (P=0.005) 。流式分选结果显示：组织块法和酶消化法获得 CD34 和 CD117 双阳性细胞所占比例分别为 (0.16±0.05)%和(0.44±0.07)% ，差异有统计学意义 (P=0.005) 。免疫荧光染色 显示，分选出的干细胞培养 1 周后组织块法获得双阳性干细胞的阳性率 (89.41±2.06)% ，酶消化法为 (94.03±1.83)% ，P0.05 。流式细胞仪检测分选出的干细胞中CD31 、VEGF2 和SMA 阳性率分别为 (0.12±0.01)% 、 (0.19±0.02)%和 (0.45±0.01)% ，与阴性对照组差异无统计学意义 (P0.05) ，排除成熟内皮细胞和平滑肌细胞存在 的可能性。分选出的干细胞进行管腔形成实验进一步证实其具有向内皮分化的潜能。上述结果显示，采用酶消化 法可以获得形态更好、数量更多、存活率相对更高的干细胞，可广泛用于临床和基础研究。 : 大隐静脉，血管干细胞，原代培养，组织块贴壁法，酶消化法 An improved method for stem cell derivation from human great saphenous vein Siying Ling, Baiyang Zhang, Yong Teng, Wei Wei, Wu Yu, Jianming Sun, Bo Tang, and Yikuan Chen Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China Abstract: The objectiue was to explore how to improve stem cell derivation from human great saphenous vein. After the saphenous vein was cut into small pieces, the cells of the vessel wall were obtained by tissue adherent method and dig