反义cmyc对MCF7细胞hTERT基因表达抑制作用的研究.docVIP

泸州医学院 硕t学位论文 反义c-myc对MCF-7细胞hTERT基因表达抑制作用的研究 姓名：马莉 申请学位级别：硕士 专业：病理学与病理生理学（遗传） 指导教师：税青林反义c-myc对MCF-7细胞hTERT基因表达 抑制作用的研宄 摘 要 目的：研究脂质体LipfectAMINETM （LR）介导的c-myc反义寡核苷 酸（ASODN）对MCF-7细胞端粒酶催化亚单位hTERT基因表达的抑制 效应，进一步阐明c-myc对hTERT基因的调控作用，并为针对端粒酶活 性抑制的乳腺癌的基因治疗提供理论依据。方法：培养MCF-7细胞，待 细胞生长状态良好并达到指数生长期时，根据所购脂质体的厂家推荐剂 量，按照每孔脂质体200（11，寡核苷酸500gl的剂量配成转染复合物，加 入各孔细胞中。研宄设置对照组、LR-SODN组及LR-ASODN组，每组6 个复孔。在转染24小吋、48小吋、72小吋后，分别收集各组细胞，用 UNIQ柱式TRIZOL提取法提取各组总RNA,按MMLV 一步法PCR （略 作改进）进行hTERT mRNA表达的检测，紫外凝胶成像分析仪进行凝胶 电泳产物的灰度扫描，以hTERT与内对照引物（3-肌动蛋白（（3-actin）的 比值表示hTERT mRNA相对表达量。实验重复5次。数据进行单因素方 差分析，ct=0.05。结果：1.1.2%变性甲