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1.下呼吸道细菌学标本的涂片检查：选择标本的脓性部分或带血部分涂成均匀薄片，做革兰氏染色镜检。低倍镜下记录细胞数，痰涂片显微镜检查的分类如下：表1 分类 每低倍镜下细胞 （个） WBC 鳞状上皮细胞 6类 25 25 5类 25 10 4类 25 10~25 3类 25 25 2类 10~25 25 1类 10 25 注:分类中1~3类不做培养，要求重新留取标本;4、5类为合格标本；6类为气管穿刺液时，如未见白细胞，而鳞状上皮细胞10个/LP时，亦应重新留取标本。 不合格标的痰标本，实验室应立即通知临床重新留痰送检。在涂片中如有柱状上皮细胞不应计数在鳞状上皮细胞中，但应注明其数量，作为合格标本对待。 合格痰标本应当记录所见细菌等病原体情况。记录细菌时要求按革兰氏阳性或阴性、球菌或杆菌等分别记录平均每油镜视野中细菌的大致数量。对于合格标本，要记录WBC内有无吞噬的细菌，这样的细胞占整个WBC总数的比例，细胞内细菌的形态等。有文献认为，吞噬有细菌的WBC达到5%以上，对医院获得性肺炎（HAP）、呼吸机相关肺炎（VAP）的诊断有重要意义。 2.下呼吸道标本的细菌培养： （1）标本培养前处理：不含或含黏液很少的合格标本，可直接接种。遇到含有大量黏液的标本，应加入等量的sputosol(一种商品化的痰液溶解剂），作用20min溶解黏液，使痰液均质化后接种。 均质化的目的：一般情况下病原菌感染肺部其部位在下呼吸道深部，炎性渗出物为了把炎症局限就将病原菌包裹在其中，若直接接种于培养基上，包裹物中的细菌很难突破包裹在培养基上生长，而痰的均质化有助于痰核内部细菌暴露，以提高阳性检出率。 （2）分离培养：将处理后的痰液接种于血琼脂平板、含抗生素的巧克力琼脂平板、沙氏板、麦康凯琼脂平板，接种后放置在5%~10%CO2孵育箱中，35℃培养18~24h，并根据菌落及形态特点做出初步判断并进行纯培养或上细菌自动鉴定仪。如24h无细菌生长应再放置24h，再观察菌落生长情况，如仍无生长才报告48小时无致病菌生长。 （3）痰半定量：即用接种环将痰液在血平板和巧克力平板上按规定的划线要求作三区划线方式接种标本进行培养。三区划线方法：首先用无菌棉签蘸取经sputosol溶解的痰液（或将接种环通过火焰灭菌，冷却后挑取少许标本，尽量挑取有脓或血的部位），然后将其涂布在平板的第一区，并做数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一区，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区。 第一区
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