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实验四 X染色质标本制备与观察 [目的要求] （1）掌握X染色质标本制备方法及其原理。 （2）掌握X染色质的形态特征及其临床意义。 [实验原理] 一个个体不论其细胞中有几条X染色体，均只有一条具有转录活性，其余的X染色体均失活形成异固缩的X染色质。正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为10％一30％，有的可高达50％以上。其出现率的高低与个体不同生理状态、染色方法、染色技术以及X染色体在细胞核中的位置不同有关。在男性间期细胞核中则平均低于1％。一般检查X染色质确定性别时，观察200个细胞，X染色质出现5％以上者为女性。现在，X染色质检查已广泛应用于临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一种辅助诊断方法。 [实验用品] (1)器材：显微镜、载玻片、牙签。 ? (2)试剂 ：Giemsa染液、0.2％甲苯胺蓝染液 、5mol/L HCl溶液 、95％乙醇、pH 6.8 PBS (3)材料：人口腔黏膜上皮细胞。 [方法与步骤] （一） Giemsa染色法 (1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干。 (2)固定：将带有标本的载玻片置入装有新配置的甲醇-冰醋酸固定液（3：1）的染色缸中固定10min后取出，空气干燥。 (3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。 (4)染色：置Giemsa染液中染色10min ，蒸馏水冲洗后晾干，酒精灯上过火脱水，以二甲苯透明，树胶封片。 （二）甲苯胺蓝染色法 (1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干。 (2)固定：用95%乙醇固定30分钟。 (3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。 (4)染色：0.2％甲苯胺蓝染液染色5—10min。 (5)镜检：自来水漂洗，空气干燥后油镜下观察。 [观察与结果] 高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，细胞质不着色或不明显。选择核较大，染色清晰，轮廓完整，核质呈均匀细网状的细胞进行观察。找到核膜内侧缘有蓝色浓染小体的细胞核后，换油镜进一步观察。油镜下X染色质为蓝色平凸形、三角形、扁平形的浓染小体。 [注意事项] (1)取材前要漱口，以免口腔中的杂质影响观察效果。 (2)HCl水解要充分，使X染色质易于显现。 (3)临床检查时要选择形态好的细胞观察，计算100个细胞中X染色质出现的频率。 [作业] 书写实验报告，绘制X染色质图。 [思考题] 1．间期核内出现X染色质有何生理意义? 2．X染色质检测有何临床用途? * *