梗阻性黄疸致肝纤维化中炎症因子HMGB-1的研究外科学(普通外科学)专业论文.docxVIP

青海大学医学院 青海大学医学院 2009 级攻读临床医学硕士学位研究生毕业论文 PAGE PAGE 10 fibrosis 前 言 梗阻性黄疸是由于肝外胆管、肝内胆管阻塞所致的胆汁淤积性黄疸，是目前 肝胆外科常见的临床疾病症状之一；前者称为肝外阻塞性黄疸，多由肿瘤或结石 造成，压迫了肝外的胆道系统；后者称为肝内阻塞性黄疸，有时肝内胆汁淤积并 非由机械因素造成，而是由于胆汁的分泌功能障碍，肝细胞内的毛细胆管在某些 因素下，管壁的通透性增加，细胞间的内皮间隙变大，胆汁中的无机成分外渗到 组织中，造成胆汁浓度增高，而排空流量减少，导致肝组织内胆管内胆盐形成， 并且沉淀在一些细小的胆管内，或者形成细小的胆栓阻塞；在胆汁形成的过程中， 任何一个部位的胆道排除通道受到阻塞，胆汁都无法正常的得到排泄和代谢，从 而使胆汁淤积在肝脏或肝外的胆管系统中，造成肝细胞的损伤，进而发展到肝细 胞的变性坏死、液化，从而引发炎症反应，多种炎症因子发挥吞噬作用，清除坏 死的肝细胞组织，使肝细胞再生修复延缓，影响肝组织重建。在此过程中大量的 肝细胞坏死液化，一系列的炎症趋化介质，诱导炎症的发生，组织细胞表面的脂 多糖(LPS)、组织坏死后产生的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和炎症介质白细胞介素 - 1(IL- 1)等，都刺激单核巨噬细胞系统[1]，在坏死部位产生系列的炎症反应， 但是随着炎症反应的进行，一些促炎症因子的消耗殆尽，和抗炎因子的大量产生， 使炎症反应达到动态的平衡，于是炎症反应趋于平和缓慢，但是于此同时一些晚 期的炎症因子持续作用于机体如高迁移细胞家族-1，在炎症晚期发挥自己的作 用，通过特殊的途径分泌到胞外周围的组织中去，持续作用于机体。 正常人体肝组织中的HMGB-1表达及其少量,也主要在存在于肝细胞核中,肝 细胞受到外界损伤因素的影响下，肝细胞发生一系列的病理变化和自身的修复保 护机制，其基本的病理变化包括肝细胞的脂肪空泡变性、局部肝细胞的坏死以及 肝细胞的自身凋亡，形成凋亡小体[2]，致使大量的纤维结缔组织增生分隔肝脏， 肝星状细胞的萎缩坏死，细胞外基质的大量增生等。在梗阻性黄疸的发生发展中 伴随肝细胞坏死后的炎症因子的释放, 在胆汁毒性反应的作用下，产生大量的内 毒素,刺激其分泌HMGB-1,而且释放出的晚期炎症因子HMGB-1也进一步使肝脏枯 否细胞、局部坏死组织趋化过来的中性粒细胞、肝组织中的内皮细胞合成和分泌 另一种炎性介质，如白细胞介素–1（IL-1)、IL-6等[3],而这些炎症介质又反作 用于肝脏其他的单核巨噬细胞系统，通过复杂的细胞信号转导,再次增加HMGB-1 的二次分泌,在肝细胞出现坏死溶解后后,也可由坏死肝细胞被动释放 HMGB-1, 形成一个循环的炎症的放大效应[4],进一步加重了肝损伤，在后续的肝组织修复 过程中，大量的细胞外基质增生，阻断了肝细胞之间的桥梁连接，大量的结缔组 织生成，肝组织分隔成的团块状的包裹，类似小叶，从而分隔肝脏，造成肝细胞 血运受阻，肝细胞缺血后逐渐变形萎缩坏死，进一步加重了肝纤维化形成过程， 直至肝脏功能衰竭。 作为晚期炎症介质之一的炎症因子HMGB-1，在体内的分布十分广泛，其具有 多种生物学功能[5]，在机体内发挥不同的生物学作用；肝组织中，胆汁淤积使肝 细胞受损伤后，在胆汁毒性反应的作用下，在内毒素等的刺激下，一些肝枯否细 胞通过特殊的激酶信号转导、转录激活因子通路等作用机制下[6]，致使组织中 HMGB-l基因表达水平提高，从而抑制某些特殊的途径，明显下调炎症组织中巨噬 细胞系统活性，控制HMGB-l的表达水平[7]；炎症早期产生的内毒素和TNF-α也可 以从其他的途径来激活刺激HMGB-1合成，而且已经生成的炎症因子HMGB-1与 TNF-α 、IL一1β等促炎因子之间形成循环级联效应[8]，相互作用于对方，放大炎 症效果，持续炎症反应，给肝组织带来严重的损伤。 现在很多的专家学者已经采用各种方法来减轻早期的炎症反应，来控制晚期 炎症介质HMGB-1的表达，如选用①抗HMGB-1抗体,②抗Bbox抗体[9]，③丙酮酸乙 脂，④ Abox[10]，⑤重组/ 杀菌通透性增加蛋白等[11]，可有效拮抗炎症产生的晚 期介质HMGB-1，使肝组织中的内毒素水平降到最低点，保护肝脏组织。 本实验主要研究炎症因子 HMGB-1 在梗阻性黄疸致肝纤维化过程中，作为晚 期炎症介质，胆汁淤积对肝脏组织损伤后，肝细胞的酶学变化同该炎症因子之间 的动态变化水平，通过检测黄疸发生过程中，肝功能的变化水平，寻早最佳的治 疗时机和药物干预浓度，探讨这一特殊的晚期炎症因子，在梗阻性黄疸进程里， 胆汁毒性肝细胞损伤后，致肝纤维化的发病机制的作用及其临床意义。 第一章 材料与方法 1.1 材料 1.1.1动物