生物工程上游技术实验-生工16级.pptVIP

二、实验原理 转化是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株(R-，M-)，这些变异株可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。 受体细胞经过一些化学试剂如CaCl2、 RbCl等处理后，细胞膜的通透性会发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 三、实验材料 E. coli DH5α菌株：R-，M-，Amp- 实验八的连接产物 四、试剂 1、含氨苄青霉素(Amp, 100mg/L)的LB固体培养基 2、X-gal储存液（20mg/mL） 3、IPTG储存液（200mg/mL） 4、0.05 mol/L CaCl2溶液 五、实验步骤 1、受体菌的培养  从LB平板上挑取新鲜活化的E. coli DH5α单菌落，接种于3-5mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养12h左右，直至对数生长后期。 将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100mL LB液体培养基中，37℃振荡培养2-3h至OD600 =0.5左右。 (实验老师已帮大家完成) 2、感受态细胞的制备 (CaCl2法)