粉棒束孢提取物清除自由基活性及成分研究-微生物学专业论文.docxVIP

I I 摘要 粉棒束孢是一类寄主范围广、应用前景广泛的虫生真菌。本研究对 43 株不 同来源的粉棒束孢提取物的清除自由基活性进行了研究，发现 RCEF3608 的甲醇 提取物具有较强的清除 DPPH 自由基活性，当菌丝浓度为 30mg/ml 时，其甲醇提 取物的自由基清除率为 64.96±0.78%。同时发现不同菌株提取物的清除自由基 活性具有较大差异。 对具有不同清除自由基活性的粉棒束孢菌株的孢子萌发及菌丝生长进行了 紫外辐射胁迫试验，发现：紫外辐射能大大减小孢子的发芽率，但清除自由基活 性强的菌株的孢子表现有较强的耐紫外能力，其萌发率较高，因此菌株提取物的 清除自由基活性可能作为优选抗性菌株的指标之一；菌丝的紫外照射试验结果显 示，虽然个别清除自由基弱的菌株（RCEF5122）在受较长紫外照射后，其清除自 由基活性有所变化，但总体来看，虽然不同供试菌株的菌落生长都受到一些影响， 但单位重量菌丝提取物的清除自由基活性变化不十分明显，这可能与菌株在培养 过程中自我修复有关。 虽然紫外照射对菌株提取物的清除自由基活性影响较小，但是否对粉棒束孢 代谢物中非自由基清除剂有影响尚不清楚，因此研究中还对紫外照射后的所有成 分变化进行了高分辨液质联用分析，发现紫外照射后，一些易形成阴离子的代谢 物的量有所减少，但其具体原因尚不明了。 本研究还对筛选出具有较强清除自由基活性的菌株RCEF3608 的代谢物及具 清除自由基活性的组分进行了全面分析。高分辨HPLC-DAD-MS分析结果表明，在 粉棒束孢RCEF3608 菌丝的甲醇提取物中成分较为复杂，除了含有棕榈酸、油酸 外。还含有分子式为C20 H30 N4 O6 0、C18 H41 N5 O7 、C27 H41 N3 O5 、C24 H45 N5 O7 、C20 H45 N5 07 、 C25 H41 N9 O3 、C27 H45 N9 O3 、C39 H65 N9 O5 、C41 H77 NO9 、C37 H65 N9 O5 等物质。而在乙酸乙酯的提 取物中除含有油酸、亚油酸、棕榈酸外，还含有分子式为C27 H41 N3 O5 、C29 H45 N3 O5 、 C25 H37 N3 O5 、C27 H41 N3 O6 、C18 H41 N3 O5 、C25 H45 N3 O5 、C33 H45 N3 O5 、C26 H38 N4 05 、C14 H36 N10 O2 等 物质。采用二苯基苦基苯肼自由基薄层实验法（DPPH-TLC）对粉棒束孢菌株菌丝 甲醇提取物进行了清除自由基活性的定性测定。采用HPLC-MS-DPPH联合分析，发 现粉棒束孢甲醇提取物中具有较强清除自由基的活性成分可能为C27 H41 N3 O5 。数据 库查询发现该分子可能为一新化合物。 本研究还以清除自由基活性为指标对菌株 RCEF3608 的培养方法进行了优 化，同时利用反向半制备型高效液相色谱对粉棒束孢中的清除自由基活性物质进 行了初步分离制备，并对该组分进行了纯度及相关分析，为进一步展开相关研究 提供基础。 关键词： 粉棒束孢, 紫外辐射, 成分分析, 清除自由基, HPLC-MS, 分离纯化。 II II Abstract Isaria farinosa is a kind of entomogenous fungus with wide host range and promising utilization perspectives. Free radical scavenging activity screening of 43 strains of Isaria farinosa of different origin revealed that methanol extract from mycelia of RCEF3608 had the strongest radical scavenging activity. At a mycelia concentration of 30mg/ml the radical scavenging rate of the methanol extract was 64.96±0.78%. The screening revealed also that the radical scavenging activities of different strains were very different. Isaria farinosa strains possessed different radical scavenging activity were tested under ultraviolet radiation stress. The result