当归多糖抑制IDA大鼠hepcidin表达的研究及当归多糖铁口服液的研制-药剂学专业论文.docx

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 1 摘 要 本实验室参照已上市的进口补铁制剂多糖铁复合物力蜚能(Niferex)，合成了 当归多糖铁复合物(Angelica sinensis polysaccharide iron complex，APIC)，并经药 理实验证实 APIC 对慢性病贫血(ACD)和缺铁性贫血(IDA)大鼠贫血状态的改善 作用较力蜚能好。故我们推测 APIC 中的当归多糖 (Angelica sinensis polysaccharide，ASP)能够参与机体铁代谢，提高机体的铁吸收与铁利用。因此， 本论文第一部分研究 ASP 抑制 hepcidin 的表达作用，IDA 大鼠灌胃给予 ASP 溶 液后，测定大鼠体内 hepcidin 水平的变化，并检测大鼠肝脏中 hepcidin 基因上游 调控分子 C/EBPα、SMAD4、STAT3/5 以及 P-STAT3/5 的表达，探讨 ASP 抑制 hepcidin 表达的分子机制，丰富了 APIC 的补铁通路，同时为进一步研究 ASP 参 与机体铁代谢的新药理作用打下基础；第二部分研究 APIC 口服液及其药动学， 为临床治疗缺铁性贫血提供一种新型药物，并为 APIC 的临床给药方案提供依据。 第一部分 当归多糖抑制 IDA 大鼠 hepcidin 表达的研究 采用低铁饲料并辅以定期放血法建立 IDA 大鼠模型，大鼠造模成功后分为 rhEPO 组（腹腔注射 rhEPO，2000IU·kg-1，qd×3），ASP 组（灌胃 ASP 溶液，1g·kg-1 ， qd×14），阴性对照组（灌胃等体积生理盐水，qd×14），采用 ELISA 法测定大鼠 血清中 hepcidin 与 EPO 的含量，Western blot 法检测各组肝脏中 hepcidin 基因上 游相关信号蛋白的含量，SPSS 13.0 软件进行数据统计分析。 ELISA 检测结果显示，ASP 可显著提高 IDA 大鼠体内 EPO 的表达水平，并 呈现两个峰形，给药后 12h 达到第一个峰值，较 rhEPO 给药组晚；类同 rhEPO， ASP 也可显著抑制 hepcidin 的表达，ASP 组在给药后 24h 下降到最低值，与给药 前相比，下降率为 31.8%，rhEPO 组在给药后 12h 下降到最低值，与给药前相比， 下降率为 13.4%。表明 ASP 对 IDA 大鼠 hepcidin 的抑制作用比 rhEPO 更显著。 Western blot 检测结果显示，ASP 和 rhEPO 均可显著抑制 IDA 大鼠 C/EBPα、 P-STAT3/5 的表达，此外，ASP 还能够抑制 SMAD4 的表达。而两组 total-STAT3/5 的表达水平较对照组均无明显变化。表明 ASP 对 hepcidin 的抑制作用是通过下 调转录调控因子 SMAD4 的表达量，并通过刺激机体内源性 EPO 的分泌进一步 下调 C/EBPα 及 P-STAT3/5 的表达水平得以实现的。 第二部分 当归多糖铁口服液的研制 APIC 性质稳定，在水溶液中 pH 近中性，不易氧化，水解，对光不敏感。 依据现代药剂理论，尽可能使处方单一化。本实验以口感、外观、稳定性为指标， 筛选最佳甜味剂、防腐剂和稳定剂。结果表明：加入 0.05%的甜菊糖和阿斯巴甜， 0.1%山梨酸钾和 0.1%CMC-Na 后，口服液澄清，口感最佳，稳定性好。 对本制剂进行了质量控制和初步稳定性研究。按照《中华人民共和国药典》 2005 年版第一部附录口服液制剂下的规定进行检查，结果表明各项指标均符合 要求。采用置换碘量法测定铁含量，硫酸-苯酚法测定多糖含量，结果显示置换 碘量法加样回收率为 99.63%，RSD 为 0.64%，硫酸-苯酚法加样回收率为 99.71%， RSD 为 2.4%，表明这两种方法快速简便、准确可靠；该制剂自然储存三个月无 明显变化，恒温加速试验三个月也符合要求，表明本制剂稳定性好。 对本制剂在大鼠体内的药动学过程进行研究，探讨本制剂在正常大鼠体内给 药剂量与药动学参数之间的关系，并比较其在正常大鼠与 IDA 大鼠体内的药动 学差异。以低铁饮食合并定期放血法建立大鼠 IDA 模型，以火焰原子吸收法测 定血清铁浓度，DAS 2.0 软件求算药动学参数，SPSS 13.0 软件进行数据统计分 析。结果显示本制剂在两种不同生理状况下大鼠的药动学过程均符合二室模型。 正常大鼠 t1/2α，t1/2β，t1/2Ka，Tmax，Cmax 随剂量增加无显著变化，但 CL/F 随剂量 增加而增大，AUC(0-7)与剂量不呈线性关系：当剂量为 5.83 mg·kg-1 时，APIC