复元胶囊调控JNK信号通路保护骨关节炎软骨细胞的实验研究-中西医结合临床专业论文.docx

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 AP Ammonium persulfate 过硫酸铵 Bp Base pair 碱基对 CCK-8 Cell Counting Kit-8 CCK-8 试剂盒 c-DNA Complementary deoxynucleic acid 互补脱氧核糖核酸 DMEM Dulbeccos modified Eagles medium Dulbecco 改良的 Eagle 培养基 EDTA Ethylene diaminetetraacetic 乙二胺四乙酸 FBS Fatal bovine serun 胎牛血清 FCM Flow Cytometer 流式细胞术 GAPDH Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 IL-1β Interleukin-1 beta 白细胞介素-1β JNK c-Jun N-terminal kinase c-Jun 氨基末端激酶 MMP Matrix metalloproteinase 基质金属蛋白酶 mRNA Messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 OA Osteoarthritis 骨关节炎 PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 PVDF Polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯 Q-PCR Real-timeQuantitativePCR Detecting System 实时 HYPERLINK /view/8509540.htm 荧光定量核酸扩增 检测系统 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SW1353 Human chondrosarcoma cells 人软骨肉瘤细胞 TBST Tris-Buffered-Saline with Tween 洗膜缓冲液 Tris Trishydroxymethyl aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 1 复元胶囊调控 JNK 信号通路保护骨关节炎软骨细胞的 实验研究 摘要 目的 研究复元胶囊对 OA 软骨细胞凋亡、细胞外基质降解的保护作用 及可能涉及的机制。 方法 体 外 培 养 人 软 骨 肉 瘤 细 胞 （ SW1353 ）， 给 予白细胞介素 -1β （interleukin-1 beta,IL-1β）刺激，复元胶囊含药血清和 c-Jun 氨基末端 激酶（c-Jun N-terminal kinase, JNK）特异性抑制剂（SP600125）干预， 随机分为正常组、模型组、抑制剂组、复元胶囊组、复元胶囊+抑制剂 组，分别采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率，CCK-8 检测细 胞增殖活性，实时 HYPERLINK /view/8509540.htm 荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time Quantitative PCR Detecting System, HYPERLINK /tag/q-pcr Q-PCR ） 检测 基 质 金 属 蛋 白 酶 (matrix metalloproteinases, MMPs) 3、13 mRNA 的表达，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞信号因子磷酸化 c-Jun 氨基末端活化蛋白激酶(p-JNK) 和 Bax 的蛋白表达。 结果 模型组与正常组比较，前者 G0/G1 期的百分率增加，S 期及 G2/M 期的百分率减少，细胞增殖指数（PI）减少；细胞凋亡率显著增高； 2 细胞增殖活性降低；MMP-3、MMP-13 mRNA 表达显著增高；p-JNK 和 Bax 蛋白表达均明显增加（P0.01）。干预组与模型组比较，前者 PI 增加；细胞凋亡率显著降低；细胞增殖活性增加；MMP-3、MMP-13 mRNA 表达显著降低；p-JNK 和 Bax 的蛋白表达均减少（P0.01 或 P0.05）；其中复元胶囊+抑制剂组的各项指标变化最明显（与模型组 比较 P0.01）。 结论 复元胶囊可抑制 OA 软骨细胞的凋亡并促进增殖；抑制细胞外基 质的降解；复元胶囊防治骨关节炎的作用强于单一的 JNK 特异性抑制 剂；其作用机制可能与抑制 JNK 信号通路有关。 关键词：复元胶囊，骨关节炎，c-Jun 氨基末端激酶，Bax，基质 金属蛋白酶 3 THE RESEARCH FOR PROTECTION OF FUYUAN CAPSULE ON OSTEOARTHRITIS CHONDROCYTES VIA JNK SIGNALING PATHWAY ABSTRACT Objective To in