道真山银花化学成分分析及粗多糖免疫学活性的初步研究-药物分析专业论文.docxVIP

遵义医学院硕士学位论文张艳 遵义医学院硕士学位论文 张艳 万方数据 万方数据 道真山银花化学成分分析及粗多糖免疫学活性的初步研究 中文摘要 目的 对遵义道真地区山银花（Lonicera flos）中的主要成分用不同分析方法进行含 量测定，建立道真地区山银花的指纹图谱，可以为道真山银花化学成分进一步分析提 供依据；对多糖成分进行了初步免疫学活性的初步试验，为以后山银花多糖的免疫活 性的进一步研究提供依据。 方法 采用紫外可见分光光度法(UV-VIS)与高效液相色谱法(HPLC)对道真山银花中 的主要成分进行含量测定，并进行系统适应性和方法学的考察；对不同批次道真山银 花进行高效液相指纹图谱研究，对其色谱图进行了相似度的比较；以提取时间、提取 温度、料液比以及提取次数 4 个因素，设计 U15（54）均匀实验对多糖的提取工艺进 行优化；用制备的山银花粗多糖进行初步免疫学活性的试验，选择环磷酰胺(CTX)诱 导的免疫低下的小鼠模型，设置空白组、模型组以及粗多糖低剂量组（200mg/kg?d）、 中剂量组（400mg/kg?d）、高剂量组（800mg/kg?d），取脾脏、胸腺进行脏器指数的考 察，测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，测定半数溶血值（HC50）、脾淋巴细胞的增 殖指数。 结果 UV-VIS 法测定山银花中的总黄酮成分、绿原酸类成分、总皂苷成分的平均含 量分别是 22.09%、9.45%、29.62%，线性范围分别是 25.85～51.7μg、42.32～105.8μg、 150.5～365.5μg；HPLC 法测定山银花中的芦丁、绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙的平均 含量分别是 1.12%、2.48%、7.77%，线性范围分别是 0.1625～4.88μg、2.175～6.96μg、 0.966～7.728μg；建立不同批次道真山银花高效液相指纹图谱，比较分析得到 13 个特 征共有色谱峰，其色谱图的相似度均在 0.95 以上；均匀实验得出的多糖提取最优工 艺条件是：温度 100℃，料液比 1：30，提取 3 次，每次 2h； 小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬鸡红细胞的实验，模型组与空白组比，小鼠巨噬细胞的吞噬能力降低，差异极显著 （P0.01），山银花粗多糖高剂量组与模型组比，巨噬细胞的吞噬能力升高，差异极 显著（P0.01）；脏器指数的测定结果显示，模型组与空白组比，脏器指数减小，差 异显著（P0.05）；粗多糖中剂量组与模型组比脏器指数增加，差异极显著（P0.01）； 半数溶血值（HC50）的测定结果为，模型组与空白组比，HC50 降低，差异显著（P0.05）, 2 粗多糖低剂量、中剂量组与模型组比，HC50 升高，差异极显著（P0.01）；脾脏淋巴 细胞增殖指数的测定结果显示，不同浓度的金银花多糖可促进小鼠脾淋巴细胞的增 殖，在浓度 500μg/ml 时作用最强，增殖指数为 1.521。 结论 HPLC 法测定道真山银花中绿原酸及和灰毡毛忍冬皂苷乙的含量，均符合 2010 版《中国药典》的规定；10 个批次道真山银花 HPLC 指纹图谱的相似度均在 0.95 以 上，有 13 个共有峰，按照相关规定可建立其指纹图谱的特征共有色谱峰，能够为道 真地区山银花药材的质量控制提供依据；均匀试验优化山银花粗多糖的提取工艺，最 优提取工艺稳定；通过对 CTX 诱导的免疫缺陷小鼠的相关指标，包括巨噬细胞的吞 噬功能、脏器指数、HC50 以及脾淋巴细胞的增殖指数的测定，山银花粗多糖可能对 小鼠的巨噬细胞吞噬功能、体液免疫及体外细胞免疫提高的作用。 关键词 山银花；含量测定；指纹图谱；多糖；均匀试验；免疫活性 3 Analysis of the chemical composition of Daozhen Lonicera Flos and preliminary study of the immunological activity of polysaccharides Abstract Objective To provide the basis for further study of Lonicerae Flos in Daozhen, Zunyi, two analytical methods, HPLC and UV-VIS, were employed to determinate the contents of main constituents. Meanwhile, fingerprint of Lonicerae Flos was established by HPLC – DAD and preliminary immunology screening test was carried out, so as to find