蛋白酶Corin与妊娠期高血压疾病的研究-内科学(血液病学)专业论文.docxVIP

蛋白酶 蛋白酶 Corin 与妊娠期高血压疾病的研究 中文摘要 II II 蛋白酶 Corin 与妊娠期高血压疾病的研究 中文摘要 妊娠期高血压疾病严重影响母婴健康，是孕产妇及围生儿发病及死亡的主要原因 之一。近来研究发现，抗血管生成因子 sFlt-1，sEng 的升高，促血管生成因子胎盘生 长因子（PlGF）的下降可能参与妊娠期高血压疾病的形成及进展。我们课题组研究发 现Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶 Corin 在调节高血压和心功能方面有非常重要的作用，与高 血压、心肌肥厚及心力衰竭的发病有关。妊娠期高血压疾病为高血压的特殊类型，有 研究表明 Corin 可能在妊娠高血压发病中起作用。 目的：以妊娠期高血压疾病患者为研究对象，通过检测育龄女性血浆 Corin 水平 及血管生成因子，分析血浆中可溶性 Corin 与妊娠期高血压疾病的关系，并对妊娠期 高血压疾病疾病患者 Corin 基因进行分析，发现与疾病相关的基因突变，探讨妊娠期 高血压发病的分子机制，并为妊娠期高血压疾病的诊断提供新方法。 方法： 1、应用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）检测实 验组及对照组共计 456 人血浆中 Corin、sEng、sFlt-1、PlGF、sFlt-1/PlGF 水平。 2、对子痫前期患者 Corin 基因进行测序，通过 Chromas 软件将测序结果与 Corin 基因序列 NM_006587.2 进行比对。根据检测到的突变位点，采用定点突变的方法构 建突变质粒 K317E-Corin。 3、将野生型质粒 wt-Corin 及 Corin 突变体转染 HEK293 细胞及稳定表达人 pro-ANP 重组蛋白的 HEK293 细胞，收集上清及裂解液,通过 Western blot 分析突变体 K317E 突变对 Corin 的表达及功能的影响。 结果： 1、血浆中可溶性 Corin 水平，妊娠女性显著高于正常未孕组；妊娠组中，子痫 前期组显著高于正常孕妇（1.31 ± 0.06 vs 0.95 ± 0.03 ng/mL, p0.001）；单纯妊娠期高 血压组及单纯蛋白尿组分别为 1.07 ± 0.04 ng/mL 和 1.25 ± 0.06 ng/mL，单纯蛋白尿组 显著高于正常妊娠组（p 0.001）。 III III 2、子痫前期患者组，血浆 PlGF 值显著低于正常育龄孕妇组（39.1 ± 9.2 vs 96.0 ± 10.0 pg/mL，p=0.001），血浆 sFlt-1 值显著高于正常育龄孕妇组（16.0 ± 1.5 vs 8.4 ± 0.4 ng/mL, p0.001），sFlt-1/PlGF 比率显著高于正常育龄孕妇组（1352.5 ± 236.0 vs 261 ± 25.9, p0.001），血浆 sEng 值显著高于正常育龄孕妇组（17.6 ± 0.5 vs 14.9 ± 0.3 ng/mL， p0.001）。 3、对子痫前期患者组 Corin 基因进行测序分析，发现其中一患者的第七号外显 子出现改变，致使 Corin 蛋白 317 号氨基酸由赖氨酸 K 变为谷氨酸 E,即 K317E。在 其他患者及正常人中未发现此改变，认定其为基因突变。 4、将野生型 Corin （wt-Corin）及 K317E 表达载体转染 HEK293 细胞或稳定表 达人 pro-ANP 的 HEK293 细胞，发现 K317E 表达量未受明显影响，但活化 pro-ANP 为 ANP 的能力降至 wt-Corin 的 36?6%。 结论： 1、血浆可溶性 Corin 在子痫前期患者中显著升高，提示可作为诊断该病的分子 标志。 2、在子痫前期患者发现 Corin 的基因突变，使第 317 号氨基酸由赖氨酸 K 变为 谷氨酸 E（K317E），该突变国内外未见报道，为新发现的基因突变。 3、体外细胞实验研究显示，K317E 突变影响 Corin 的活化及对 pro-ANP 的剪切 能力，是妊娠期高血压疾病的潜在发病机制。 关键词：妊娠期高血压疾病；子痫前期；Corin；基因突变 作 者： 石森森 指导老师： 董宁征 Ro Role of Corin in hypertensive disorders complicating pregnancy Abstract PAGE PAGE IV Role of Corin in hypertensive disorders complicating pregnancy Abstract Hypertensive disorders complicating pregnancy (HDCP) is a leading cause of mat