蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞的特性比较及分析-遗传学专业论文.docxVIP

Classified Index: Q71 U.D.C.: 577.21 Dissertation for the Master Degree in Science The Characteristic Comparison and Analysis of Layer and Broiler Skeletal Muscle Satellite Cells Candidate: Liu Xia Supervisor: Associate Prof. Chen Yan Academic Degree Applied for: Master of Science Speciailty: Genetics Affiliation: Life Science and Engineering Date of Defence: June, 2008 Degree-Conferring-Institution: Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 摘 要 肌卫星细胞是一类存在于成体骨骼肌纤维基膜和原浆膜间的梭形或纺锤 型细胞。卫星细胞在骨骼肌生长发育中起关键作用，它调节着出生后肌肉的 生长，是成熟动物体骨骼肌的干细胞之一。 蛋鸡和肉鸡骨骼肌发育性状的差异在出生后表现得最显著，这与两者骨 骼肌组织中存在的卫星细胞的特性具有很大的联系。为了解卫星细胞在成体 骨骼肌发育中的作用，以及在蛋、肉鸡骨骼肌发育中作用的差异，本课题在 研究建立 7 日龄鸡骨骼肌卫星细胞分离、培养方法的基础上，对蛋肉鸡肌卫 星细胞的特性进行了比较和分析。 采用机械和酶消化方法分离鸡胸肌细胞；用过滤和差速贴壁方法得到 较纯的卫星细胞；用高浓度血清培养基维持卫星细胞的生长；利用肌卫星细 胞特异性标记基因 desmin 的抗体检验所获细胞为肌肉卫星细胞。从而建立 了 7 日龄鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养系统，为进行鸡成体骨骼肌发育的 研究奠定条件基础。 为了比较蛋肉鸡肌卫星细胞的生长特性，利用血球计数板进行细胞计数 绘制出二者的细胞生长曲线。结果显示：在体外相同的培养条件下，肉鸡肌 卫星细胞的增殖、分化速度大于蛋鸡肌卫星细胞；同时蛋肉鸡肌卫星细胞中 细胞周期调控相关基因（p21 和 Cyclin D1）表达存在差异，可能是肉鸡卫 星细胞的生长速度高于蛋鸡卫星细胞以及分化时间明显早于蛋鸡的原因之 一。 为了比较分析细胞因子对于蛋肉鸡肌卫星细胞特性的影响，通过流式细 胞仪检测经细胞因子 bFGF 和 Myostatin 处理后，蛋肉鸡骨骼肌卫星细胞的 细胞周期变化情况；并通过 RT-PCR 分析各功能基因的表达变化差异。结果 表明：经相同剂量的同种细胞因子处理后，蛋鸡卫星细胞对于 Myostatin 的 抑制作用十分敏感，而肉鸡则对 bFGF 的促进增殖作用反应强烈；经细胞因 子 处 理 后 ， 在 功 能 基 因 的 表 达 水 平 上 蛋 肉 鸡 之 间 也 存 在 着 差 异 ， 其 中 Myostatin 对于蛋鸡肌卫星细胞中 myoD 和 myogenin 的表达抑制作用要较肉 鸡中显著得多，其它功能基因的表达情况变化不明显，还有待于进一步的研 究。 以上结果为进行蛋鸡和肉鸡在出生后骨骼肌发育性状的差异研究、及今 后成体骨骼肌发育、卫星细胞在临床上的应用等研究提供理论基础。 关键词 鸡骨胳肌卫星细胞；细胞生长曲线；细胞因子；细胞周期； RT-PCR - II- - - PAGE IV- Abstract A satellite cell is a kind of cell which is located between the basal lamina and basement membrane of the myofiber. It plays a key role in the growth of skeletal muscle, and regulates muscle growth and development in the posthatch, which is the first stage of muscle growth in adults. A satellite cell is one of the skeletal muscle stem cells in the adult animal. Layer and broiler are two lineages formed through long-term selection. There are big differences between their skeletal muscle growth a