改性聚乳酸-Ⅰ型胶原复合支架荷载的骨髓间充质干细胞促进糖尿病大鼠创面愈合的研究-外科学(整形)专业论文.docx

PAGE PAGE 10 3.3 结果………………………………………………….…29 3.4 讨论………………………………………………...….32 3.5 小结……………………………………...…………35 六、参考文献……………………..……………………………...………36 七、附录………………………………………………….………………40 八、致谢……………………………...…………………………….…….41 九、综述………………………………………………………………….42 十、参考文献…………………………………………………………….49 英文缩略词表 英文缩写 英文名称 中文名称 DU diabetic ulcers 糖尿病溃疡 BMSCs bone mesenchymal stem cells 骨髓间充质干细胞 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲亚砜 PBS phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 HE hemateoxylin and Eosin 苏木精-伊红 STZ streptozocin 链脲佐菌素 MMPs matrix metalloproteinase 基质金属蛋白酶 AGEs advanced glycation end-products 晚期糖基化终末产物 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 CK cytokeratin 角蛋白 Ab antibody 抗体 IH immunohistochemical 免疫组织化学 DAB diaminobenzidine 二胺基联苯胺显色液 EP epidermis 表皮 ECM extracellular matrix 细胞外基质 VEGF vascular endothelial cell factor 血管内皮细胞因子 Ang-1 angiogenesis factor-1 血管形成因子-1 EGF epidermal growth factor 表皮细胞生长因子 NP neuropeptides 神经肽 bFGF basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞因子 WC I wound closure index 创面闭合指数 TGF PCNA transforming growth-factor Proliferating cell nuclear antigen 转化生长因子 增殖细胞核抗原 5- BrdU PLA 5- Bromodeoxyuridine Polylactic Acid 5-溴脱氧尿嘧啶 聚乳酸 改性聚乳酸-I 型胶原复合支架荷载的骨髓间充质干细 胞促进糖尿病大鼠创面愈合的研究 目的： 中文摘要 1.探讨骨髓间充质干细胞体外分离、培养及其分化的性能； 2.制备聚乳酸-I 型胶原复合支架，研究其荷载的骨髓间充质干细胞向表皮干细胞分 化的能力； 3.研究聚乳酸-I 型胶原复合支架荷载的骨髓间充质干细胞对糖尿病大鼠创面愈合 的影响。 方法： 1.全骨髓法体外分离、培养及纯化扩增骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测骨髓间 充质干细胞表面分子标志物，测定纯化程度；分别添加成骨、成脂及表皮干细胞 诱导剂后，检测成骨、成脂及向表皮干细胞分化的结果。 2.制备聚乳酸-I 型胶原蛋白复合支架，将其与骨髓间充质干细胞共培养，添加表皮 干细胞诱导剂后，检测表皮干细胞标志物角蛋白 19 和整合素 β1 的表达。 3.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病大鼠模型，大鼠麻醉下制作创 面，将与聚乳酸-I 型胶原复合支架共培养的 5-BrdU 标记的骨髓间充质干细胞移植 于糖尿病大鼠创面，观察其对创面愈合的影响，采用透明膜法计算不同时期的创 面愈合率，并对其差异进行统计学分析；组织学观察各组创面新生皮肤的差异， 免疫组化法检测新生皮肤中表皮细胞的来源。 结果： 1. 成功体外分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测纯化度高达 94% 左右，体外分化诱导实验检测到细胞钙化、脂肪颗粒及表皮干细胞标志物角蛋 白 19 和整合素 β1。 2. 成功制备聚乳酸-I 型胶原复合支架，与骨髓间充质干细胞共培养良好，添加表 皮干细胞诱导剂后，成功检测到聚乳酸-I 型胶原复合支架荷载的细胞依旧表达 表皮干细胞标志物角蛋白 19 和整合素 β1。 3. 成功建立糖尿病大鼠创面模型，观察 5-BrdU 标记的骨髓间充质干细胞与聚乳 酸-I 型胶原复合支架共培养后可促进糖尿病大鼠创面的愈合，创面渗出及炎性 反应减少，统计学分析显示实验组创面愈合率明显高于对照组，组织学观察发 现新生皮肤的厚度、血管化、皮