富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤保护作用和机制的实验分析-介入放射学专业论文.docx

PAGE PAGE VI III III 中文摘要 富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤保护作用和机制的实验研究 屏障和降低脑水肿，进而说明 DMF 对大鼠 SAH 后 EBI 具有一定神经保护作用。 关键词：富马酸二甲酯；早期脑损伤；蛛网膜下腔出血 第二部分 富马酸二甲酯对大鼠 SAH 后大脑皮层 Keap1-Nrf2-ARE 氧化应激传导通路的调控作用 目的：观察大鼠 SAH 后大脑皮层 Keap1-Nrf2-ARE 氧化应激传导通路及其下游 抗氧化酶基因表达变化及富马酸二甲酯对 Keap1-Nrf2-ARE 氧化应激传导通路影响， 探讨富马酸二甲酯对 SAH 后早期脑损伤神经保护作用机制。 方法：健康成年雄性 SD 大鼠 48 只，随机化分为：对照组 (n=12), SAH 组 (n=12), 安慰剂组 (n=12) 和 DMF 组 (n=12)。采用向视交叉前池注血技术，构建大鼠 SAH 模型，对照组开骨窗后不注入动脉血，DMF 组给予胃管灌注 DMF 治疗，每次注射剂 量 15mg/kg，分别在 SAH 后 1h、12、24h 和 36h 胃管灌注，共灌注 4 次。安慰剂+SAH 组注射等容量溶剂（生理盐水，15 mg/kg）。48 小时后断头处死大鼠，立即取大鼠颞 底皮层脑组织后做标本检测，采用 RT-PCR 法测定 NQO1、GST-α1 和 HO-1 的 mRNA 表达，酶活性检测 GST-α1 和 NQO1 量；采用免疫组化方法检测 HO-1、Nrf2 和 Keap1 表达；Western blot 法测定 Nrf2、Keap1 和 HO-1 变化；Fluoro-jade B 和 TUNEL 染色 方法检测神经细胞凋亡情况；EMSA 法检测 Nrf2 的 DNA 结合情况和结合活性；ELISA 法测定 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 炎症介质的表达。 结果：RT-PCR结果显示对照组NQO1 、GST-α1和HO-1的mRNA表达量较低，和 对照组相比，SAH组NQO1 、GST-α1和HO-1的mRNA表达水平明显增高（P 0.01）， 安慰剂组与SAH组对比无明显差异（P 0.05），在DMF治疗组中NQO1 、GST-α1和 HO-1的mRNA表达水平明显高于安慰剂组和SAH组（P 0.01）；酶活性检测结果提 示安慰剂组和SAH组的GST-α1、NQO1酶活性明显高于对照组（P 0.01），而安慰剂 组和SAH组对比无明显差异（P 0.05），DMF组中GST-α1、NQO1酶活性明显高于 SAH组（P 0.01，P 0.05）；免疫组化法检测结果（Nrf2、Keap1和HO-1免疫反应性 主要在脑组织中神经元细胞内，阳性：细胞质棕色黄染）显示对照组Nrf2、Keap1和 HO-1阳性率较低，与对照组相比，SAH组和安慰剂组的Nrf2、Keap1和HO-1阳性率明 富马酸二甲酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤保护作用和机制的实验研究 中文摘要 显增高（P 0.01），安慰剂组与SAH组对比无明显差异（P 0.05），DMF治疗组中 Nrf2、Keap1和HO-1阳性率高于SAH组及安慰剂组（P 0.01）；Western blot结果显示 对照组Nrf2、Keap1和HO-1蛋白水平较低，和对照组相比，SAH组Nrf2、Keap1和HO-1 蛋白水平明显增高（P 0.01），安慰剂组与SAH组对比无明显差异（P 0.05），DMF 组中Nrf2、Keap1和HO-1蛋白水平明显高于SAH组和安慰剂组（P 0.01）；TUNEL 和Fluoro-jade B染色技术检测结果表明，在对照组有少量凋亡细胞，而安慰剂组和SAH 组大鼠脑组织凋亡率高于对照组（P 0.01），安慰剂组与SAH组对比无明显差异 （P 0.05），DMF治疗组中大鼠皮层脑组织凋亡率明显低于安慰剂组与SAH组（P 0.01）；EMSA法检测结果显示，DMF治疗Nrf2的DNA结合情况和结合活性明显高 于对照组、安慰剂组和SAH组（P 0.01），安慰剂组与SAH组对比无显著差异 （P 0.05）；ELISA法测定结提示DMF治疗组的IL-1β、IL-6和 TNF-α炎症介质的表 达量明显低于安慰剂组和SAH组（P 0.01），安慰剂组与SAH组对比无显著差异 （P 0.05）。 结论：1.在SD大鼠SAH后48h能够激活Keap1、Nrf2通路蛋白及下游抗氧化酶基因 表达，产生抗氧化作用，减轻免疫炎症，进而保护神经细胞。2.富马酸二甲酯可能通 过激活和稳定Keap1-Nrf2-ARE氧化应激传导通路，达到对大鼠SAH后EBI神经细胞保 护。 关键词：富马酸二甲酯；早期脑损伤；蛛网膜下腔出血； Keap1-