复方鳖甲软肝片对非酒精性脂肪肝的保护作用及机制研究-病理学与病理生理学专业论文.docx

贵阳医学院 贵阳医学院 2011 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 复方鳖甲软肝片对非酒精性脂肪肝的保护作用及机制研究 研究生 ：钱程 导师：杨勤 教授 摘要 目的：观察大鼠在非酒精性脂肪肝形成过程中肝细胞核因子(HNF4α) 与过氧化物酶体增殖物激活受体 α(PPARα)表达的变化，旨在探讨非酒精性脂肪 肝发生机制中 HNF4α 与 PPARα 的作用。应用中药复方鳖甲软肝片治疗大鼠非酒 精性脂肪肝，观察其对 HNF4α 与 PPARα 表达的影响。方法：雄性 SD 大鼠 32 只，随机分为正常组、模型组（非酒精性脂肪肝组）、自然恢复组（对照组）与 复方鳖甲软肝片组（鳖甲组）。模型组、对照组和鳖甲组大鼠采用高脂高糖饮食 制备非酒精性脂肪肝大鼠模型，造模时间为 12 周。造模成功后，对照组大鼠给 与蒸馏水灌胃 8 周，鳖甲组大鼠给予 0.6g/kg/d 剂量复方鳖甲软肝片灌胃 8 周， 同时给与普通饲料饮食。实验结束时杀鼠取血，测定血清谷草转氨酶（AST）、 谷丙转氨酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、 高密度脂蛋白（HDL）、及游离脂肪酸（FFA）；取肝组织，测定肝组织中超氧化 物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；取肝脏,行 HE 染色与电镜标本制备，光镜 下观察肝组织的病理变化，电镜下观察肝细胞超微结构变化；采用免疫组化检测 肝组织 HNF4α 的表达情况；免疫组化法检测肝组织 HNF4α 的表达情况和实时荧 光定量法检测肝组织中 HNF4α 基因和 PPARα 基因的表达。结果：与正常组比较， 模型组大鼠血清中 TC、LDL、FFA 明显增高（p0.05），HDL 明显降低（p0.05）， 而 ALT 及 AST 的变化不明显；与对照组比较，鳖甲组大鼠肝脏 TG、TC 、LDL、 HDL 与 FFA 水平无明显差异，无统计学意义。肝组织中 SOD 活力和 MDA 水平 结果显示，与正常组比较，模型组肝组织 SOD 活力明显下降，MDA 的含量明显 升高（p0.05）；与对照组比较，鳖甲组肝组织 SOD 活力明显升高，MDA 的量 明显降低（p0.05）。免疫组化结果显示 HNF4ɑ 在各组大鼠肝脏表达无差异。实 时荧光定量结果显示，与正常组比较，模型组 HNF4α 和 PPARα 在肝脏 mRNA 水平的表达明显降低（p0.05）；与对照组比较，鳖甲组 HNF4α 和 PPARα 在肝 脏 mRNA 水平的表达有所升高，但无统计学意义。统计学相关性分析显示 HNF4α 和 PPARα 无相关性。结论：1.HNF4α 与 PPARα 的表达下调可能参与了非酒精 性脂肪肝的发生；2.单纯依靠饮食调整可改善脂代谢紊乱；3.复方鳖甲软肝片能 增强肝组织抗氧化能力，但对非酒精性脂肪肝无明显治疗作用。 关键词：大鼠非酒精性脂肪肝 HNF4α PPARα 脂代谢紊乱 复方鳖甲软肝片 前 言 随着人们饮食结构、生活方式的改变，日常膳食中以脂肪为代表的高热量 食物成分所占比例明显增加，伴随与代谢异常密切相关的非酒精性脂肪肝病 （nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）的发病率大幅上升,已成为 21 世纪全球 重要的公共健康问题之一。在我国 NAFLD 的发病率也有明显上升的趋势，成为 我国慢性肝病问题的重要原因之一[1] 。NAFLD 是一种与饮酒无关的、由多种病 因引起的肝细胞内脂质蓄积过多的临床病理综合征，病情由轻到重包括单纯性脂 肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis, NASH）、肝纤维化 和肝硬化[2] 。 目前关于NAFLD的发病机制尚未明确，认为与脂肪代谢紊乱、脂质过氧化 反应等氧化应激密切相关[3] 。关于NAFLD的发病机制，国内外学者对脂代谢通 路的关键信号转导因子包括肝X受体（liver X receptor, LXR ）、固醇调节元件结 合蛋白（sterol regulatory element binding protein ,SREBP）、过氧化物酶体增殖物 激活受体(peroxisome proliferator -activated receptors,PPARs)等等进行的大量研究 [4-5]结果表明都与NAFLD的发生发展密切相关。 肝细胞核因子（Hepatocyte nuclear factor,HNF）属于核受体超家族2A亚家族 （NR2A），是调节肝脏内基因特异性表达的一类转录因子，这些转录因子及其 相互作用构成了复杂的调控网络，精确地控制着肝脏的发育和肝细胞的功能。 HNF4α在分化成熟的肝细胞中高水平表达，其受体具有脂溶性激素受体的特性， 可直接进入肝