氟哌啶醇调控小鼠皮层神经元电压门控钠通道的实验研究-免疫学专业论文.docx

万方 万方数据 学位论文知识产权声明 本人郑重声明:我所提交答辩的学位论文，是本人在导师指导下完成的 成果，该成果属于汕头大学医学院，受国家知识产权法保护。本人在毕业离 校前会将有关的研究资料和结果全部上交导师，离校后使用与学位论文相关 的数据资料参加学术会议、公开报告、发表论文和申请基金等，须征得导师 及导师所在单位的同意。不得擅自对外披露本论文尚未公开的研究成果。本 人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 注:保密的学位论文在解密后适用本声明。 研究生签名:设在治 日期:且全年工月义日 导师签名:马飞 N 日期:且全年工月之日 汕头大学医学院硕士研究生毕业论文 中文摘要 1.背景和目的 经典抗精神病类药物氟哌啶醇(Haloperidol, Hal)为丁酰苯类化合物，适用于治疗以兴奋 躁动、紧张焦虑、幻觉妄想为主的精神分裂症和狂躁症。选择性地拮抗多巴胺 D2 受体，是 其作为抗精神病药物的基础。它的局限性主要表现在临床应用导致患者锥体外系症状 （ Extrapyramidal syndrome，EPS）。 电压门控钠通道（Voltage-gated sodium channels, VGSCs）是形成动作电位的上升支的 基础，控制着神经元的兴奋性和动作电位的形成，对于可兴奋细胞的电学特性至关重要。 以前的研究认为氟哌啶醇主要通过拮抗多巴胺受体调控神经元的兴奋性、突触可塑性 等功能，而对多巴胺受体的下游离子通道的影响还有待研究。本实验运用全细胞膜片钳技 术研究不同剂量及不同作用时间下氟哌啶醇对小鼠皮层神经元电压门控钠离子通道和动 作电位的影响，并分析多巴胺 D2 受体样激动剂溴隐亭(Bromocriptine, BCT)和脑源性神经 营养因子（Brain derived neurotrophic factor, BDNF）对氟哌啶醇的干预作用。 2.方法 2.1 无血清培养小鼠原代皮层神经元，免疫荧光鉴定神经元纯度； 2.2 不同剂量(10, 25,250μmol/L 持续 5min) Haloperidol 处理神经元，电压钳检测 Na+电流的 变化以及冲洗后的变化； 2.3 Haloperidol（25μmol/L 持续 5min）处理神经元，拟合 VGSCs 激活、失活和恢复曲线； 2.4 电流钳检测 Haloperidol（25μmol/L 持续 5min）处理神经元细胞，观察动作电位的变化； 2.5 不同剂量(0.1, 1, 10, 25,100μmol/L)Haloperidol 分别持续孵育神经元 24h；25μmol/L 和 100μmol/L Haloperidol 分别孵育神经元不同时长(30min, 1, 2, 4, 8, 24, 48 h)后检测神经 元 Na+电流的变化； 2.6 Haloperidol（25μmol/L 持续 24h）处理神经元，检测 VGSCs 激活、失活特性以及恢复 特性的变化； 2.7 Haloperidol（25μmol/L 持续 24h）处理神经元，检测动作电位的变化； I 汕头大学医学院硕士研究生毕业论文 2.8 Bromocriptine 和 BDNF 分别先于 Haloperidol 1h 处理神经元,记录 Na+电流及激活，失活 特性的变化。 3.结果 3.1 通过间接免疫荧光鉴定，小鼠原代皮层神经元纯度在 95%以上，胞体饱满周围晕光明 显，突起交织成稀疏的网络； 3.2 Halperidol 急性作用下对 Na+电流幅度呈剂量依赖性抑制，IC50=19.38μmol/L； 3.3 与对照组相比，Halperidol 急性作用下，改变了失活曲线的 V1/2，使其由-46.62mV 超级 化至-59.10mV； 3.4 与对照组相比，Haloperidol (25μmol/L) 急性作用下完全阻断动作电位的生成。 3.5 与对照组相比，慢性作用下，Haloperidol 呈剂量依赖性和时间依赖性增强钠电流幅度， IE50=10.64μmol/L； 3.6 与对照组相比，慢性作用下 Haloperidol 使 VGSCs 的激活曲线左移，V1/2 由-31.19mV 超 级化至-41.04mV，失活曲线无显著变化； 3.7 与对照组相比，慢性作用下 Haloperidol 降低动作电位的阈值，增强神经元的放电频率。 Bromocriptine 和 BDNF 均可阻断 Haloperidol 慢性作用下的钠电流增强作用，有效逆转 VGSC 的失活加速，并且 BDNF 可能逆转 VGSC 的加速激活。 4.结论 急性作用下氟哌啶醇以剂量依赖方式可逆性地抑制小鼠皮层神经元 VGSC 的活性，诱 导神经元兴奋性下降；慢性作用下氟哌啶醇剂量依赖性