低渗透压对大鼠三叉神经节神经元GABA激活电流的抑制作用-生理学专业论文.docx

华中科技大学同济医学院硕士学位论文 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 PAGE PAGE 1 低渗透压对大鼠三叉神经节神经元 GABA 激活电流 的抑制作用 研究生：衡 璐 导 师：刘长金 教授 摘 要 目的：探讨低渗透压对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸（GABA）激活电流 （IGABA）的调制作用及其胞内信号传导机制。方法：全细胞膜片钳技术。结果： ①实验中大部分受检细胞（89.2％）对外加 GABA（10～1000?M）敏感，可产生 一具有明显浓度依赖性的内向电流，该电流可被 GABAA 受体特异性拮抗剂荷包牡 丹碱阻断。②预加低渗透压（220 、260 、300mOsm），对 IGABA 产生抑制作用, 该抑制作用呈可逆性和非电压依赖性。低渗透压+GABA 的量效曲线较单独的 IGABA 量效曲线明显下移，而两者的阈值和最大反应浓度基本不变，分别为 10?M 和 1000?M；两条曲线的 EC50 值非常接近，分别为 29.41?M 和 33.02?M; 预加低渗透 压后最大反应浓度时，IGABA 的幅值减少了（31.38±2.13）%。③低渗透压对 IGABA 的抑制作用可被 TRPV4 受体非特异性阻断剂钌红部分阻断，可被 TRPV4 受体激 动剂 4ɑ-PDD 增强。④细胞外灌流 PKC 的抑制剂 BIM 可部分逆转低渗透压对 IGABA 的抑制作用。结论：本实验提示，低渗透压作用于 TRPV4 受体，部分通过激活 PKC 途径来减少 GABAA 受体介导的电流，这可能是低渗透压对 IGABA 的调节机制 之一。 关键词 低渗透压 ；GABAA 受体；TRPV4 受体；三叉神经节神经元；全细胞膜 片钳 Abstract Objective: This study was aimed to investigate the modulatory effect of hypotonic on GABA-activated currents (IGABA) in cultured rat trigeminal ganglion (TG) neurons .Method: Whole-cell patch clamp technique. Result: The results were as follows: ① The majority of examined neurons (89.2%) were sensitive to GABA (10-1000 ??M). GABA activated inward currents in a concentration-dependent manner, and IGABA were blocked by bicuculline, a selective antagonist of the GABAA receptor. ②When Hypotonic （220, 260,300mOsm） was pre-applied extracellularly, it reduced IGABA significantly. This inhibitory effect was reversible and voltage-independent.The concentration-response curve of GABA was shifted downward by hypotonic without any change of the threshold value.The values of two curves were very close(33.02 ??M and 29.41?M). Hypotonic decreased the maximal amplitude of IGABA by（31.38±2.13）%. ③This inhibitory effect was reversed by ruthenium red, a nonselective TRPV4 receptor antagonist, and was increased by 4 ɑ -PDD, a selectively TRPV4 receptor agonist. ④ Pre-application of BIM, a PKC inhibitor, partially reversed the inhibitory effect of Hypotonic. Conclusion: Hypotonic inhibited IGABA through activation of TRPV4 receptor. The