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HPLC法快速测定墨西哥玉米和苏丹草中的糖类 HPLC法快速测定墨西哥玉米和苏丹草中 的糖类 研究报告 刖昌 HPLC法快速测定墨西哥玉米和苏丹草中的糖类 谷淑波樊广华张晓艳 (山东农业大学农学院山东泰安271018) 摘要本文采用高效液相色谱外标法,在Waters公司的Sugar-PakI专用糖柱上,利用 示差折光检测器,成功地同步测定出墨西哥玉米和苏丹草中糖类的含量.该方法快速准 确,以水作流动相,柱温为90?,相关系数在0.9998以上,加标回收率为98.7%, 103.2%,精密度较高,RSD为2.67%,3.10%.测定结果表明,不同留茬和不同密度的牧 草各糖组分的含量是不一样的. 关键词高效液相色谱法墨西哥玉米和苏丹草蔗糖葡萄糖果糖甘露糖 近年来,我国各地区农牧业发展较快,尤其是乳 品产业的迅速发展,带动草业和农业的发展.墨西哥 玉米和苏丹草是发展牧渔业的优质牧草,一,其含糖量 是衡量牧草营养品质的一项重要指标0,测定不同密 度和不同留茬的苏丹草和墨西哥玉米的含糖量,对于 优化其栽培措施,提高其品质有着重要意义. 用高效液相色谱测定植物和果实中的糖已有报 道一,但应用此方法对墨西哥玉米和苏丹草中糖类 的测定尚未见报道,本文采用高效液相色谱法对墨 西哥玉米不同留茬和苏丹草不同密度所含几种糖类 的含量进行测定,并考查本方法的精密度和准确度. 本方法快速,准确.对部分样品进行测定,为该牧草 的品质研究及栽培措施的改进提供理论依据. 1实验部分 1.1仪器和主要试剂 仪器:高效液相色谱仪:Waters2410示差折光检 测器,Waters515泵,7725i进样阀,色谱柱(Waters公 司的Sugar-PakI(300mm×6.5mmi.d),离心机,超声 波清洗机,水浴锅. 主要试剂:蔗糖,葡萄糖,果糖,甘露糖,乙醇,均 为国产分析纯;重蒸水. 1.2色谱条件 流动相:水(含0.0001MCalciumEDTA),流速为 0.5mL/min,柱温:90?. 1.3标准溶液 分别准确称取1O0mg蔗糖,葡萄糖,果糖,甘露糖 标准品,置于50mL容量瓶中,用少量水溶解后,定容至 刻度,即为各组分均为2.g/mL的标准贮备液. 1.4糖类的处理 取0.1g烘干样品加入7ITlL80%的酒精,沸水浴 30min后,常温下离心20min(4000rpm),将上清液移 人25mL容量瓶,再向离心管中加入7mL80%酒精 离心20min,上清液移人容量瓶,再重复一次该步 骤.定容后,将溶液倒人蒸发皿中,在80?水浴蒸 干,蒸干后用4.5mL蒸馏水洗净,将洗液移入离心 管中存放,过C18柱后,再过0.45p.m的微孔滤膜,滤 液待上机测定. 1.5标准曲线的制作 取标准溶液lmL,分别用水稀释1.5倍,2.0倍, 2.5倍,3.0倍,取20进样分析,以峰面积为纵坐 标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,线性回归方程和 相关系数(见表1). 表1线性回归方程和相关系数 2结果与讨论 2.1不同留茬牧草中糖的分析 对不同留茬牧草中的蔗糖,葡萄糖,果糖和甘露 糖进行外标法测定(见图1,表2).可看出,不同留 茬的牧草其各种糖组分的含量不一样.墨西哥玉米 头茬草留茬和三茬草留茬以果糖含量居高,二茬草 留茬以甘露糖居高;苏丹草低密度和中密度留茬葡 萄糖的含量较高,高密度留茬甘露糖含量最高. 琨代仪墨(.ca) 8.0012.00 图1墨西哥玉米的色谱图 峰:1.蔗糖;2.葡萄糖;3.果糖;4.甘露糖 表2不同留茬牧草中糖分的动态变化 2.2方法的精密度 准确称取同一低密度留茬苏丹草样品5份,依 上述方法操作,平行测定5次,结果蔗糖,葡萄糖,果 糖,甘露糖的RSD分别为2.67%,2.99%,3.10%, 2.72%(见表3). 表3方法的精密度(n=5) 26 2.3方法的回收率试验 取已知含量的中密度留茬苏丹草样品平均分成 5份,分别加入5个不同质量的蔗糖,葡萄糖,果糖, 甘露糖,配成5个已知样,按本方法的操作条件进行 测定(见表4). 表4方法回收率测定 3结论 通过对本方法的研究,该方法适合大批量牧草 中糖组分的测定.具有较高的精密度,RSD为 2.67%3.10%;加标回收率为98.7%一103.2%; 操作省时,易行,定性定量准确. 经测定,不同留茬墨西哥玉米和苏丹草中各糖 组分的含量不同,寻求一种最佳留茬,使糖组分达 到最佳组合,以提高其品质,还有待进一步研究. 参考文献 1苏丹草[J].四川草原,2OO4,(8):61 2李荫玺,张启福,王开宏等.发展生态牧渔业的一种优质 牧草[J],生态经济,1995,(I):46,49 3潘庆