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核酸变性后.doc

核酸变性后 中华生物竞赛网 核酸变性后,一系列物理和化学性质也随之发生改变,如260nm区紫外吸收值升高,粘度下降,浮力密度升高,同时改变二级结构,有的可以失去部分或全部生物活性。DNA的加热变性一般在较窄的温度范围内发生,很像固体结晶物质在其熔点突然熔化的情况,因此通常把热变性温度称为“熔点”或解键温度,用Tm表示。对DNA而言,通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度(或变性量达最大值的一半时的温度)称为该DNA的熔点或解链温度。在此温度可由紫外吸收(或其他特性)最大变化的半数值得到。DNA的Tm值一般在70?,85?。RNA变性时发生与DNA变性时类似的变化,但其变化程度不及DNA大,因为RNA分子中只有部分螺旋区。 ?核酸的复性:变性DNA在适当条件下,又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构,这个过程称为复性。DNA复性后,许多物理、化学性质又得到恢复,生物活性也可以得到部分恢复。DNA的片段越大,复性越慢;DNA的浓度越高,复性越快。 DNA或RNA变性或降解时,其紫外吸收值增加,这种现象叫做增色效应,与增色效应相反的现象称为减色效应,变性核酸复性时则发生减色效应。它们是由堆积碱基的电子间相互作用的变化引起的。 (三)酶的特点及功能 酶是由活细胞产生的、具有催化活性和高度专一性的特殊蛋白质。酶被称为生物催化剂。生物体内错综复杂的代谢反应必须具有酶才能按一定规律有条不紊地进行。酶缺陷或酶活性被抑制都会引起疾病。例如,人体缺乏酪氨酸酶会引起白化病。许多中毒性疾病,如有机磷中毒、氰化物中毒、重金属的中毒等,都是由于某些酶的活性被抑制所引起的。 1(酶促反应的特点 酶是生物催化剂,因而它既有与一般催化剂相同的性质,也有与一般催化剂不同的特点。酶和一般催化剂的共同点是:?酶在催化反应加快进行时,在反应前后酶本身没有数量和性质上的改变,因而很少量的酶就可催化大量的物质发生反应。?酶只能催化热力学上允许进行的反应,而不能使本来不能进行的反应发生。?酶只能使反应加快达到平衡,而不能改变达到平衡时反应物和产物的浓度。因此,酶既能加快正反应进行,也能加快逆反应进行。酶促反应究竟朝哪个方向进行,取决于反应物和产物的浓度。酶与一般的催化剂相比又有其特点,最突出的是它的高效性和专一性。 2(酶的化学本质 通过对酶的性质、组成和结构等等方面的研究证实,酶是蛋白质(也有RNA)。蛋白质分为简单蛋白质和结合蛋白质两大类。酶按照化学组成也可分为单纯酶和结合酶两大类。脲酶、胃蛋白酶和核糖核酸酶等一般水解酶都属于简单蛋白质,这些酶只由氨基酸组成,此外不含其他成分。转氨酶、碳酸酐酶、乳酸脱氢酶及其他氧化还原酶等均属于结合蛋白质。这些酶除了蛋白质组分外,还含有对热稳定的非蛋白的小分子物质,前者称酶蛋白,后者称辅因子。酶蛋白与辅因子单独存在时,均无催化活力,只有二者结合成完整的分子时,才具有活力。此完整的酶分子称为全酶(全酶,酶蛋白十辅因子)。有的酶的辅因子是金属离子,有的是小分子有机化合物。通常将这些小分子有机化合物称为辅酶或辅基。辅酶或辅基并没有本质的差别,只不过是它们与蛋白质部分结合的牢固程度不同而已。通常把与酶蛋白结合比较松的,用透析法可除去的小分子有机物称为辅酶;反之为辅基。在酶的催化过程中,辅酶或辅基的作用是作为电子、原子或某些基团的载中华生物竞赛网 中华生物竞赛网 体参与反应并促进整个催化过程。金属在酶分子中或作为酶活性部位的组成成分,或帮助形成酶活性所必需的构象。一种辅酶常可与多种不同的酶蛋白结合而组成具有不同专一性的全酶。可见决定酶催化专一性的是酶的蛋白质部分。 3(酶的活性中心和必需基团 酶作为蛋白质,其分子比大多数底物要大得多,因此在反应过程中酶与底物的接触只限于酶分子的少数基团或较小的部位。因分子中虽然有许多基团,但并不是所有的基团都与酶的活性有关,其中有些基团若经化学修饰(如氧化、还原、酰化、烷化等)使其改变,则酶的活性丧失,这些基团就称为必需基团。常见的必需基团有Ser的羟基,His的咪唑基,Cys的巯基,Asp、Glu的侧链羧基等。 活性中心(或称活性部位)是指酶分子中直接和底物结合,并和酶催化作用直接有关的部位。对于单纯酶来说,它是由一些氨基酸残基的侧链基团组成的。对于结合酶来说,辅酶或辅基上的某一部分结构往往也是活性部位的组成部分。 酶的活性中心的必需基团可分为两种:一种是与作用物结合的必需基团,称为结合基团,它决定酶的专一性;另一种是促进作用物发生化学变化的基团,称为催化基团,它决定酶的催化能力。但也有些必需基团同时具有这两种作用。另外还有些必需基团位于酶活性中心以外的部位,但仍是维持酶催化作用所必需的,这种称为酶活性中心以外的必需基团。由此可见,酶除了活性中心以外,其他部分并不是可有可无的

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