OLYMPUSIX51倒置显微镜操作规程-厦门大学生物医学仪器共享平台.DOCVIP

倒置荧光显微镜 操作规程 Olympus 厦门大学医学院中心实验室 黄静茹 2016年10月 说明： ①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架； ⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮； ⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；?聚光镜高度调节钮；?聚光镜对中旋钮； ?视场光阑调节杆；?孔径光阑调节杆；?聚光镜转盘；?荧光光闸（SHUTTER）； ?荧光激发块转盘；?荧光减光阀 一、开机 打开透射光源（白光）主开关①； 打开荧光光源（汞灯高压电源）②； 打开电脑，进入 cellSens Standard工作站； 备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。 二、明场观察（Bright Field BF） 1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动聚光镜转盘?到“BF”位置，直到听到咔嗒声； 4、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）； 5、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮③至合适的强度， 调 节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察,根据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩； 三、相衬观察（Phase contrast PH) 1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜； 4、转动聚光镜转盘?，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）； 5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）； 6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧进行聚焦观察,根 据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩。 表1： 物镜、相差元件匹配表 物镜 4X 10X、20X 40X 相差元件 PHL PH 1（PH C） PH 2 四、荧光观察 1、如果需要，可先用明场观察对标本定位，再转入荧光观察； 2、如果不再需要BF观察，可关闭白光电源②；或将白光光强调节钮③逆时针旋 至最低，将孔径光阑向右拨至最小； 3、转动荧光激发块转盘?，根据所用的荧光染料选择匹配的荧光激发块； 表2：荧光激发块 序号 激发块名称 激发光λ（nm） 发射光λ（nm） 滤掉光λ（nm） 1 WU 330-385 420 ＜400 2 WB 450-480 515 ＜500 3 WG 510-550 590 ＜570 4 WBV 400-440 475 ＜455 5 WIY 545-580 610 ＜600 6 BF 明场、相差 4、打开荧光光闸?（SHUTTER），使其置于“O”位置； 5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）； 6、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察，根据荧 光强度选择合适的ND滤镜（荧光减光阀）?进入光路。（第一个ND100：100% 的荧光强度进入光路；第二个ND6：6%的荧光强度进入光路，第三个ND25: 25% 的荧光强度进入光路）。 五、CCD成像 1、cellSens Standard工作站中，,点击右侧摄像控制中的实时观察； 2、将光路选择杆⑤拉出（，CCD成像光路），调节粗/细调焦旋钮进⑧行聚焦； 3、曝光：可先选择自动曝光，参照自动曝光时间，再通过手动调节曝光时间使 图像更清晰； 4、背景校准：进行明场和相差成像时执行白平衡 ，荧光成像时执行黑平 衡， 在样品空白背景处画一个小区域，软件自动以该处为背景对整幅 图像进行调整，使所选区域显示为白色或黑色； 5、各成像参数设定完毕后，点击拍照 ，仪器自动成像； 6、右键文档工具栏窗口或在文件处进行保存（TIF或JPG格式）。 六、关机 1、实验完毕，先退出工作站； 2、将透射光光强调节钮③逆时针旋至最低，关闭透射光主开关（TH4）①； 3、确认汞灯开启超过0.5h，方能关闭汞灯高压电源②； 4、用无水乙醇擦拭镜头，并将物镜转盘转至空位，清理载物台及桌面； 5、刻录数据：放入全新光盘，将数据发送至光盘，电脑右下角出现刻录提示， 点击该提示进入，确认待刻录数据，点击“刻录到光盘”----下一步，刻录 完毕，光盘自动退出。 6、关电脑及显示器。 七、图像处理 1、标尺：在工具栏上选择正确的物镜倍数，点击“视图”---标尺，软件自动将 标尺加在图像上，再点击“图像”----印入信息，保存即可。 2、测量：点击“测量”----测量工具，软件左侧显示出测量工具栏，点击选择 所需的测量工具，在图像上画目标区域，右键点击结束测量即可显示结果。 测 量结果可导出Exc