大豆疫霉菌无毒基因克隆及马铃薯抗病品种紫花白抗晚疫病机制的分析.pdf

摘 要 卵菌纲是近些年来由鞭毛菌亚门中新分出的一大类，能够侵染很多重要的粮食 作物、林业、观赏植物进而对自然生态系统造成严重影响。大豆疫霉病和马铃薯晚 疫病是由卵菌纲真菌 Phytophthora sojae 和 Phytophthora infestans 分别侵染大 豆和马铃薯后发生的两种主要病害。目前，防治这两种病害最为有效、经济以及环 保的方式依然是培育优良的抗病品种。因此，利用分子生物学技术克隆和鉴定致病 疫霉的无毒基因、解析马铃薯抗晚疫病机制可以为大豆和马铃薯的抗病育种奠定基 础。 本论文中采用了筛选候选 Avh 基因方法克隆了 P.sojae 无毒基因 Avr1d。利用 遗传作图分析确定了 Avr1d 与 Avh6 共分离。在含有抗性基因 Rps1d 的大豆叶片中进 行功能验证，证实了 Avh6 就是 Avr1d。基因比对结果得知 Avr1d 基因在对 Rps1d 有 毒的生理小种的基因组中是缺失的。在对 11 个大豆疫霉生理小种进行基因测序分析 得知，Avr1d 有 2 个 allele。在 Rps1d 大豆植株中瞬时表达全长野生型 Avr1d 蛋白 和全长 RFLR 突变体蛋白（RFLR 突变为 AAAA）的结果表明，RFLR 保守区域不能介导 Avr1d 分泌到寄主细胞的过程中。脂类结合实验结果表明 effector 区域的正电荷氨 基酸决定 Avr1d 蛋白与寄主细胞膜上的 PtdIns(4)P 结合。 论文中利用分离群体分组分析法结合新一代测序技术找到了与无毒基因 Avr1c 紧密连锁的 3 个单核苷酸多态性位点。利用 MapMaker 软件和生物信息学比对软件， 最后确定 Avh275c 在遗传群体中的基因型与 Avr1c 的表型共分离。基因枪瞬时表达 实验也同时证明 Avh275c 就是 Avr1c。对 15 个无毒生理小种测序分析得知，Avr1c 有 3 个 allele。Avr1c 与 Avr1a 在大豆疫霉基因组上的位置非常相近。这两个基因 在氨基酸序列 N 端有高度的一致性，差异在 C 端显著较大。 通过对马铃薯抗感品种紫花白和夏坡蒂在接种晚疫病菌前后活性氧产生的速度 和活性氧量的积累以及抗病信号路径中重要蛋白在转录水平的变化来阐述马铃薯抗 病品种紫花白抗晚疫病菌的机制。结果表明，活性氧爆发是抗病品种紫花白抵抗晚 疫病菌侵入重要的抗病信号机制。活性氧在抗病品种中积累主要通过定位于细胞膜 上的 NADPH 氧化酶实现。同时，通过对主要的抗病信号路径中（SA 和 JA 路径）重 要蛋白接种后转录水平的检测发现信号分子也介入到了紫花白对晚疫病的抵抗过程 中。 关键词：大豆疫霉菌；马铃薯晚疫病菌；无毒基因；效应子；CAPs 标记；抗病机制 Identification of Avirulence Gene of Phytophthora sojae and the Study on Resistance Mechanism of Potato cultivar Zihuabai to Phytophthora infestans Abstract Oomycetes which are separated from mastigomycotina recently, can infect many plants. It causes serious problems on natural ecosystems by infect crops, forestry and ornamental plant. Soybean blight and potato late blight are two main diseases in soybeans and potatoes caused by Oomycetes fungi Phytophthora sojae and Phytophthora infestans separately. Currently, the most effective, economic and environmentally friendly way of p