分子生物学检测与动物试验.pptVIP

一、细菌DNA由四个碱基组成： 　　鸟嘌呤（G）　　　　腺嘌呤（A） 　　胞嘧啶（C）　　　　胸腺嘧啶（T） 　　严格的碱基配对： 　　A＝T G＝C 　　常以G＋C碱基对的摩尔百分比来测定细菌DNA四个碱基对的含量来鉴定细菌。 二、细菌DNA提取过程 (一)细菌的培养及细菌收集 　 细菌培养：液体培养，固体培养 　 细菌收集：一般要求收集2-3克湿菌体 (二)细菌破壁 　 1. 超声波破壁法 2. 氧化铝磨碎法 3. 反复冻融法 4. 化学试剂破壁法，十二烷基磺酸钠“SDS” 5. 溶菌酶溶解法 6. 其他方法：细菌研磨法、玻璃珠研磨法。 三、细菌DNA的提取方法 (一)Marmur氯仿提取法 吸出上层含核酸的水相 注意： 1. 被溶解的细菌浓度不能太低。 2. SDS为阴离子去污剂，各厂家、批号、等级差异较大。 3. 离心分层后，取水相液体要准确。 (二)细菌DNA中G+C摩尔百分比测定 　1. 化学方法　用电泳和层析等技术 　2. 物理方法　用热变性温度(目前常用方法) 　　G+C摩尔百分比测定，是细菌分类鉴定的一种重要方法。缺点：不能表达出DNA碱基的排列顺序。 核酸杂交技术 　　核酸杂交技术（technique of nucleic acid hybridization）是由现代分子生物