基于iTRAQ技术筛选早期和进展期胃癌患者血清差异蛋白.PDFVIP

宁夏医科大学学报 第 39 卷 9 期 · · JournalofNingxiaMedicalUniversity 2017 年 9 月 10 16 文章编号 ：1674-6309（20 17 ）09-10 16-06 ·论著 · 基于 iTRAQ 技术筛选早期和进展期胃癌患者血清差异蛋 白 吴 婧 ， 王会峰 ， 赵志军， 王宁菊 （宁夏医科大学总医院 ，银川 750004 ） 摘要 ：目的 筛查早期 、进展期 胃癌和健康人群血清 中差异表达 的蛋 白，以期发现与 胃癌有关 的蛋 白标志物 。 方法 用 同位素标记相对和绝对定量技术 （iTRAQ ）联合 串联液相色谱/质谱联用 （LC-MS/MS ）检测早期与进 展期 胃癌患者血清 ，筛选关键性差异表达腺苷酸核糖基化 因子 （ARF- 1）蛋 白，利用免疫组化进行 胃癌组织蛋 白差异验证 。 结果 共发现 119 个差异蛋 白质 （53 个上调 ，66 个下调 ）。 免疫组化结果显示进展期 胃癌组织 中 ARF-1 蛋 白表达量高于早期 胃癌组与癌旁正常组 ，早期 胃癌组 ARF-1 蛋 白表达量高于癌旁正常组 （P＜0.05 ）。 结论 初步筛选 了 胃癌血清 中蛋 白表达谱 ，经免疫组化验证 ARF- 1 表达水平与血清一致 。 关键词 ：胃癌 ；同位素标记相对和绝对定量技术 ；蛋 白组学 中图分类号 ：R392.12 ，R726.9 文献标识码 ：A DOI ：10.16050/j .cnki.issn1674-6309.20 17.09.008 早期发现 、诊断和治疗是提高 胃癌生存率 的 展期 胃癌患者组织 的石蜡包埋标本各 30 份 ，同 关键 。 目前临床上仍缺乏诊断效率较高 的胃癌单 时选取早期和进展期 胃癌患者癌旁正常组织 （肉 项标志物检测方法[ 1] 。 同位素标记相对和绝对定 眼可见 胃癌实体组织边缘 以外 1cm 区域 ）30 份 ， 量技术 （isobaric tag for relative and absolute quan－ 所有组织均经病理科 医师读 片证 实 。 早期 胃癌 titation ，iTRAQ）是多肽体外标记技术[2] 。 近年来 ， 组 ：平均年龄 （58.4 ± 1.23 ）岁 ，其 中男性 23 例 ，女 iTRAQ 技术 已经成功地应用于肺癌 、 前列腺癌 、 性 7 例 。进展期 胃癌组 ：平均年龄 （56.2±2.04 ）岁 ， 胰腺癌 、 胃癌等多种肿瘤 的蛋 白质组学差异研 其 中男性 26 例 ，女性 4 例 。 所有收集 的血清快速 究 中[ 3-6] 。 本研究利用 iTRAQ 标记技术联合液相 置于-80℃保存 。 标本 的采集经宁夏 医科大学总 色谱 串联质谱 （LC-MS/MS ）筛选早期 、进展期 胃 医院科研伦理委员会审议批准 ，患者本人鉴属知 癌和正常体检者血清 中的差异蛋 白，筛选 出以腺 情 同意书。 苷酸核糖基化 因子 （ARF- 1）为代 表 的具有较 高 1.1.2 主要试剂 兔抗人 ARF- 1 多克隆抗体购 诊断价值 的关键性差异蛋 白，采用免疫组化法进 于 Abcam 公 司 ，羊抗兔 IgG-HRP 、SP 三步法免疫 行组织表达 的验证 ，以期发现 胃癌早期诊断标志 组化检测试剂盒 SP-900 1 均购 自北京 中杉金桥 物 ，从而提高 胃癌早期诊断水平 。 生物技术公司。 1 材料与方法