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第一节 概述 1890年Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体制药。 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。 抗体是指能与相应抗 原特异性结合具有免疫功 能的球蛋白。 抗体的产生：机体免 疫系统受抗原刺激后，B 淋巴细胞被活化增殖和分 化为浆细胞，由浆细胞合 成和分泌的球蛋白。 免疫球蛋白的发现 20世纪60年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白，统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。所有抗体是Ig，但并非所有Ig分子都有抗体活性。 注射抗原 → IgM → IgG（10d，IgM↓） 多克隆抗体（polyclonal antibody） 指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： （1）预防、治疗感染性疾病 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风； 胎盘球蛋白 ? 抗病毒感染等； 副作用：? 超敏反应 （2）临床诊断 如：肥达氏反应——伤寒、副伤寒 缺点：特异性差，易出现非特异性交叉反应。 单克隆抗体的特点 高度特异性 均一性 来源稳定 可大量生产 单克隆抗体的应用 作为抗体制剂，用于疾病的诊断和治疗。 检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。 放射性核素标记单抗进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。 CD3单抗作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作用。 以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗。 McAb在免疫导向疗法中存在的问题 A、McAb均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗 体（HAMA），加速了排斥反应，在人体内的半衰期只有5~6h，维持有效药物作用靶组织时间； B、完整的抗体分子的相对分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。 需要解决的问题 A、降低McAb的免疫源性； B、降低McAb的相对分子质量。 解决问题的方法或途径—基因工程技术 1984年报道了人—鼠嵌合抗体，之后制备出了改型抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等多种类型，基本上消除了抗体的鼠源性（免疫源性），相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3。 第二节 单克隆抗体 单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。由于这种抗体是针对一个抗原决定族的抗体，又是单一的B 淋巴细胞克隆产生的，故称为单克隆抗体。 一、抗原与动物免疫 制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。 为使杂交瘤细胞稳定，免疫动物和骨髓瘤细胞供体同一品系动物进行免疫。 抗原与动物免疫 免疫方法：体内免疫和体外免疫 抗原：颗粒性抗原和可溶性抗原 骨髓瘤细胞系：来自BALB/c小鼠和 Lou大鼠 免疫动物：BALB/c小鼠和Lou大鼠 体内免疫法 适用于免疫原性强、抗原量较多时应用，一般用8～12周龄雌性鼠。 颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔107个细胞进行初次免疫，间隔1～3周，再追加免疫1～2次。 可溶性抗原按每只小鼠10～100μg抗原与福氏完全佐剂等量混合后注入腹腔内，进行初次免疫，间隔2～4周，再用不加佐剂原抗原追加免疫1～2次。一般再采脾细胞前3日由静脉注射最后一次抗原。刺激B细胞分裂。 脾内免疫法即在麻醉下直接将 0.1～0.2ml抗原注入脾脏进行免疫。细胞抗原需105个，可溶性抗原需10μg。 体外免疫法 用于不能采用体内免疫的情况下，如制备人源性McAb；免疫源性极弱，易引起免疫抑制。 优点：需抗源量少，免疫期短，干扰因素少。 操作：用4～8周龄BALB/c小鼠的脾脏制成单细 胞悬液，再加入适当抗原使其浓度达0.5 ～5μg/ml, 在5% CO2、37 ℃下培养4～ 5天, 再分离脾细胞,进行细胞融合。 二、细胞融合与杂交瘤细胞选择性培养 细胞融合的方法 脾细胞（1×108） 骨髓瘤细