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大肠杆菌生长曲线的测定 授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨 黄同龙 左明星 目的要求 1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。 2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。 基本原理 将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、指数期、稳定期、衰亡期。 本实验采用分光光度计进行光电比浊测定不同培养时间细菌悬浮液的光密度值，绘制生长曲线。 光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律 A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度) 朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。 FeSO4溶液在650nm的光吸收曲线 大肠杆菌悬浮液的光吸收规律： 实验表明，OD600在0.1~ 0.65之内的大肠杆菌悬浮液基本符合朗 伯－比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。 大肠杆菌梯度稀释液的光吸收曲线 器 材 1、菌 种：大肠杆菌。 2、培养基：LB液体培养基。 3、仪器与耗材：722型分光光度计、恒温摇 床、无菌试管、无菌吸管。 操作步骤 1、配制LB液体培养基100 ml，分装1支试管(5 ml/支)，剩余培养 基装入250 ml的三角瓶，121℃灭菌20min。 2、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。 3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放 入上述标记的11支无菌大试管中。 4、将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(200 rpm)，在相应时间 取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。 5、进行光密度测定时，以未接种的LB液体培养基为空白对照， 从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用LB 液体培养基稀释后测定，使OD600值在0.1~ 0.65之内。 不同培养时间的菌液 注意事项： 选用规格一致的试管； 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。 实验结果 1、将测定的OD600值填入下表： 培养时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 OD600 2、绘制大肠杆菌的生长曲线： OD600值 培养时间/h LB液体培养基配方：100ml 酵母提取物(Yeast extract): 0.5g蛋白胨(Tryptone)：1g 氯化钠(Nacl)： 1g Thanks for your attention！