化学组成与结构单位.ppt

* 细胞周期长短测定 脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法 对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。 流式细胞仪测定法(Flow Cytometry) 缩时摄像技术 可以得到准确的细胞周期时间及分裂间期和分裂期的准确时间。 * 细胞周期同步化 在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步 （自然同步化/人工同步化） 1.自然同步化： 粘菌的变形体plasmodia，细胞核同 步化达到108，体积达5~6cm。 2.人工选择同步化 3.药物诱导法 * 人工选择同步化 有丝分裂选择法： 使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃，MI高。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，则可获得一定数量的中期细胞。其优点是，操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量较少。 密度梯度离心法： 不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞，缺点是同步化程度较低。 * 药物诱导法 DNA合成阻断法 选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成，而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在S期或G/S交界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使细胞同步化。优点是同步化程度高，适用于任何培养体系。可将几乎所有的细胞同步化。缺点是产生非均衡生长，个别细胞体积增大。 分裂中期阻断法 通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的形成，将细胞阻断在细胞分裂中期。优点是操作简便，效率高。缺点是这些药物的毒性相对较大。 * 细胞的生长、分裂、衰老与死亡 美国人Leland?Hartwell、英国人Paul Nurse、Timothy?Hunt 2001年10月8日因对细胞周期调控机理的研究而荣获诺贝尔生理医学奖。 * 细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK） 周期蛋白（Cyclin）（M期特征表达蛋白） 成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF) 有丝分裂因子(MF) 细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene，CDC) * 细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK） CDC基因表达蛋白与细胞周期蛋白结合才具有激酶的活性，称为细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)。 目前发现的CDK在动物中有7种。各种CDK分子均含有一段相似的激酶结构域，这一区域有一段保守序列，与周期蛋白的结合有关。 周期蛋白（Cyclin） 目前从芽殖酵母、裂殖酵母和各类动物中分离出的周期蛋白有30余种，在脊椎动物中为A1-2、B1-3 、C、 D1-3、E1-2、F、G、H等。 * * MPF (Maturation-promoting factor，Mitosis-promoting factor) 使多种底物蛋白磷酸化的蛋白激酶；由M期Cyclin-Cdk(Cyclin-dependent protein kinase) 形成的复合物。MPF=CDK1=p34cdc2+cyclinB Mitotic Cyclin-Cdk复合物的活化与功能 活化 随Cyclin浓度变化而变化 激酶与磷酸酶的调节 活化的MPF可使更多的MPF活化 功能：启动细胞从G2期进入M期的相关事件 特异性抑制剂？ * 人M期细胞与袋鼠（Ptk）G1、S、G2期细胞融合诱导PCC（早熟凝集染色质）：提示M期细胞存在诱导PCC的因子； * 注射实验表明：孕酮诱导卵母细胞成熟；成熟卵细胞质中，含有卵母细胞成熟的因子，称做MPF。 * CDK1的调节与活化; CAK=CDK1-Activiting Kinase * * * 细胞周期调控 正常细胞凋亡 细胞癌化 干细胞 肿瘤干细胞 细胞与组织工程 药物生产 * * * * 遗传物质DNA储存、复制、转录和转录后加工的场所如何进化？？？ * 染色体（chromosome） 染色体染色质聚集而成的棒状结构 染色质(chromatin)是指间期细胞内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量的RNA组成的线性复合结构，是间期细胞遗传物质的存在形式。 核小体（nucleosome） * 核糖体 核糖体(ribosome)是合成蛋白质的细胞器。 * * 原核细胞的核糖体