合肥市宠物犬与犬粮携带沙门氏菌情况调查及耐药性研究-预防兽医学专业论文.docxVIP

Anhui Agricultural University Dissertation for the Masterate Investigation on the carrying situation of Salmonella from pet dogs and food in Hefei and analysis of their antibiotic resistance Candidate: Wang Yuanlan Supervisor: Prof. Li Yu Academic Degree applied for: Master of Agriculture Speciality: Preventive Veterinary Science Research field: Infectious diseases of domestic animals College: Animal Science and Technology College June, 2013  独创性声明 本人声明所里的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得 的研究成果。 据我所知，除 了文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为 获得安徽农业大 学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与 我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡 献均己在论文中作了明确 的说明并表示谢意。 学位论文作者签名 : _.é!星兰 签字日期 :)?I? 年 6 月 ν日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全 了解安徽农业大学 有关保留 、使用学位论文 品 的规定，有权保留并向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子 文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安散农业大学可以将学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 1收录到《中 国学位论 文全文数据库))，可以采用影印 、缩印或扫描等复制手段保存 、汇编 学位论文，向社会公众提供信息服务 。(保街的学位论文在解密后适 用本授权书〉。 学位论文作者签名 :4:z? 签字日期 : ，1;年 6月γ EI  指导教师签名 :兰绝 签字日期 :t f1 年 d 月豆-1斗  学位论文作者毕业后去向 = 工作单位: 电话: 通信地址: 邮编: I 中 文 摘 要 沙门氏菌（Salmonella）是一种重要的人畜共患病原菌，广泛地存在于人类、 畜禽、宠物、各种食物等。宠物犬误食被沙门氏菌污染的饲料后而引起感染，在 与人类密切接触的过程中，易将沙门氏菌传染给人类。同时，人类在喂食犬时， 也可以因直接接触被污染的饲料而感染沙门氏菌，从而不断扩大沙门氏菌的传播 范围。宠物犬和犬粮作为沙门氏菌的贮藏宿主，在沙门氏菌的散播及其对人类的 影响方面扮演着重要的角色。 为了解合肥市宠物犬和犬粮携带沙门氏菌情况，分离菌株的药物敏感性和耐 药基因携带情况，及耐药基因 mRNA 的表达水平，本研究采集 746 份宠物犬肛 棉拭子和 404 份犬粮样品，利用 PCR 与常规技术相结合的方法进行沙门氏菌的 分离鉴定，分别采用凝集实验和 K-B 纸片扩散法确定分离菌株的血清型和耐药 表型，用 PCR 方法检测耐药基因，同时结合表型确证实验鉴定产超广谱β-内酰 胺酶（ESBLs）菌株；利用 SYBR Green I 染料法建立 flor 基因和 sul2 基因实时 荧光定量 PCR（Real Time PCR）检测方法，并用 Real Time PCR 方法分别对不 同菌株 flor 基因和 sul2 基因的 mRNA 表达量进行测定和分析。 结果显示，宠物犬犬肛棉拭子样品中共分离沙门氏菌 19 株，阳性率为 2.55% （19/746），肠炎沙门氏菌为优势血清型；犬粮样品中分离沙门氏菌 10 株，阳性 率为 2.48%（10/404），德尔卑沙门氏菌为主要的优势血清型。在对 20 种抗生素 的感受性试验中，29 株沙门氏菌对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林耐药性最强， 而对头孢西丁和磷霉素最敏感。具有多重耐药性的菌株占分离菌株的 31.03%， 多重耐药谱为 AMC-AMP-SXT-DOX。共检测出 16 种耐药基因，其中以 strA-B 基因的检出率最高，检出率为 37.93%；其次是 blaPSE 基因，检出率为 34.48%。 结合表型确证试验，鉴定出 6 株产 ESBLs 菌株。成功建立了 flor 基因和 sul2 基 因 SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测方法，最低检测限度分别为 102 copies/μL 和 103 copies/μL。对氟苯尼考耐药的菌株 S8、S10、G8、G17、G19 的 flo