课件：细菌毒素.ppt

该激酶激活后，可激活NF-kB诱导激酶（NF-kB inducible, NIK）,继而活化IkB激酶（IkB kinase, IkK)复合物。活化的IkK将IkB磷酸化，随后磷酸化的IkB被一种26S的蛋白酶降解，NF-kB被解除抑制，游离释放，并移位进入细胞核内，与kB基序结合(kB motif)结合，启动基因转录，发挥调控作用，诱发一系列免疫炎症反应。 TLRs及其胞内信号传递分子的发现，将有助于阐明LPS介导的信号转导机制，为治疗内毒素休克这一致死性的临床综合征提供新的思路。 四 LPS生物学效应 NF-kB调控的靶基因大致有以下几种： 参与炎症和早期防御的基因 所编码的主要产物有：1）前炎症细胞因子，如TNF-a、GM-CSF、IL-1/-2/-6/-12；2）细胞黏附分子，如细胞间粘附分子；3）急性期蛋白；4）诱导酶；5）抗菌多肽，如b-防御素(b-defensins)。这些产物直接参与炎症反应和非特异性抗菌反应，也诱导协同刺激分子CD80的表达。 参与特异性免疫的基因 主要包括 MHC、IL-2/12、IFN-g、协同刺激分子CD80、CD86的编码基因。这些基因产物可协同激活特异性免疫细胞，并参与调控特异性免疫应答。 编码影响细胞凋亡的关键性蛋白的基因 如c-IAP-1/-2、Fas配体、c-myc、p53等的编码基因，这些产物可启动细胞凋亡过程。 可见，LPS一般不直接损伤各种组织器官的细胞，而是通过刺激参与先天免疫防御的各种免疫细胞和内皮/粘膜细胞，诱导产生各种细胞因子、炎症因子、急性期蛋白、活性氧/氮分子、抗菌多肽，以及激活特异性免疫细胞，引起各种组织器官以及全身性多种病理生理反应。 细菌毒素可用于制备疫苗或抗毒素等生物制品，以预防或治疗相应毒素中毒症。细菌毒素对靶位具有高度选择性、高效性，因此，可广泛应用于细胞生物学（毒素内在化的路径及其与细胞器的相互作用、越膜信号、G蛋白）、神经生物学（神经介质的释放、与突触囊泡的相互作用）、免疫学（单克隆抗体、细胞因子）、药理学(炎症因子的释放)。有目的地选择细胞特异受体或胞膜分子，可设计新的以天然、合成或重组毒素为基础的免疫原作为疫苗和有效药物或潜在的抗肿瘤或抗病毒疗法 一 药 物 厌氧芽孢梭菌属细菌能产生很多毒素，统称为梭菌毒素，其中许多可能用作临床药物。肉毒毒素A (BoNT-A)有限制地用于临床治疗许多痉挛性病症和痛症，如不随意肌（胃、肠、血管、心肌等）痉挛、张力障碍、局部肌肉痉挛、肌痉膜痛等，特别是治疗麻痹性斜视、紧张性头痛和偏头痛较为成功。 二 免疫调节 LPS可以活化单核-巨噬细胞等，分泌多种细胞因子，增强宿主的非特异性免疫功能。 三 免疫毒素 免疫毒素(immunotoxins，Its)是人工制备的导向疗法生物制品，由选择特定靶细胞的定位部分（导向载体）和杀伤靶细胞的治疗部分（弹头）构建而成。 导向载体：它的作用是代替毒素的结合区，因此必须对靶细胞有高度特异性和高亲和力。一般选择较小分子量的生物成分，如针对靶细胞膜表面特异性抗原的单克隆抗体，或是膜受体的相应配体，如细胞因子、生长因子、激素和CD抗原分子等。如制备治疗T细胞白血病和淋巴瘤的Its，导向成分可选用IL-2或IL-4；治疗上皮癌的Its可选用表皮生长因子。 Its的治疗部分一般选用生物毒素或化学制剂。常用的生物毒素有植物毒素、真菌毒素和细菌毒素。目前用得多的：白喉毒素（DT）、铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)和溶细胞毒素。此外，还可用超抗原杂合毒素（如蓖麻毒素-PEA）或双弹头毒素（一个载体连接两种毒素）。 化学交联免疫毒素 利用活泼的化学交联剂，修饰完整毒素和抗体（多位鼠源性）纯化蛋白分子肽链上的某种化学基团，将两者以共价键连接而成。这种免疫毒素分子量大、免疫原性大、组成不均一、穿透力弱，因此，临床应用上受到限制。 重组免疫毒素 （recombinant immuntoxin）利用克隆技术获取细菌毒素的编码基因，通过DNA连接酶与导向因子的基因片段连接，构建成重组免疫毒素基因，克隆至高表达质粒中，然后导入大肠埃希菌等原核细胞中表达。细菌大量培养后，收集菌体并破碎之，提纯获得免疫毒素。为增加重组免疫毒素的穿透力和降低抗体的免疫原性，可采用基因重组技术，构建单链抗体、二硫键抗体等小抗体分子和人源化抗体。但是，重组免疫毒素仍存在非特异性杀伤作用、调节手段少等缺点，对实体瘤的穿透力仍5然很弱。 基因免疫毒素 （genetic immunotoxin）弹头部分不是毒素，而是携带毒素编码基因的重组质粒。质粒在某个细胞系相关的真核启动子/增强子控制下，由导向载体引入靶细胞中，经诱导后即可表达毒素。导向部分是人源单链抗体和碱性的鱼精蛋白的基因融合表达产物。鱼精蛋白带有很强的正电荷，