第三章_固相萃技术.pptVIP

免疫亲和 即将抗体偶联到固相载体而制成免疫亲和层析柱，可对样品中能与抗体结合的特异性抗原分子进行分离、纯化。 例：将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从血清中分离其对应的抗体。金黄色葡萄球菌蛋白A（ProteinA）能够与免疫球蛋白G（IgG）结合，可以用于分离各种IgG。 1.固相萃取吸附剂的选择-固相萃取吸附剂的原则 固相萃取吸附剂最好为多孔的、具有大的表面积的固体颗粒。 固相萃取吸附剂应有较低的空白值。 萃取吸附过程必须可逆且有高的回收率。 固相萃取吸附剂要有高的化学稳定性。 固相萃取吸附剂必须与样品溶液有好的界面接触。 键和硅胶吸附剂 石墨碳 离子交换树脂 金属配合物吸附剂 聚合物吸附剂 免疫亲和吸附剂 分子嵌入聚合物 常用固相萃取吸附剂 键和硅胶吸附剂 常用的键合硅胶吸附剂表面积在50～500m2/g 之间，孔径为5～50nm ，粒径大于40μm 。一般应选择粒径小、比表面积大的吸附剂，以获得更好的萃取效果。但要注意若粒径过细，萃取时阻力增加，萃取速度下降。 1.固相萃取吸附剂的选择 应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。 2.固相萃取溶剂的选择 在固相萃取固定相活化、上样富集、淋洗杂质、分析物洗脱过程中，都涉及到溶剂选择问题。 a.固定相活化溶剂的选择 一般使用两种活化溶剂。第一种溶剂（初始溶剂）用于净化固定相，对于常用的C18键和硅胶固定相，可用甲醇有效地