山药氧化酶特性和茶黄素合成.PDFVIP

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第８期 — ２７７— 蒋长兴，焦云鹏，熊清平，等．山药氧化酶特性及茶黄素的合成［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（８）：２７７－２８０． 山药氧化酶特性及茶黄素的合成 １ ２ １ １ 蒋长兴 ，焦云鹏 ，熊清平 ，李松林 （１．淮阴工学院生命科学与化学工程学院，江苏淮安２２３００３；２．江苏食品职业技术学院，江苏淮安２２３００３） 　　摘要：采用硫酸铵盐析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析等方法得到山药多酚氧化酶（ＰＰＯ），纯化倍数为５２．５倍，活力回 收率为１６．４５％。结果表明：ＰＰＯ最适温度为３５℃，最适ｐＨ值为５．０。温度５５℃时ＰＰＯ较为稳定，酶活性为５５％； ｐＨ值６．５～７范围内酶活性变化不大，约为８０％。山药ＰＰＯ催化合成茶黄素，产量为２８．１％。茶黄素－３－没食子酸 酯（ＴＦ－３－Ｇ）、茶黄素 －３′－没食子酸酯（ＴＦ－３′－Ｇ）、茶黄素双没食子酸酯（ＴＦＤＧ）、茶黄素（ＴＦ）含量分别为 １２．４％、２．７８％、９．４６％、０．８５％。 　　关键词：山药；多酚氧化酶；茶黄素；合成 　　中图分类号：Ｓ６３２．１０１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）０８－０２７７－０３ 　　山药为薯蓣科薯蓣属蔓生植物，主要分布于热带和亚热 －ｐａｃｋｖｐ－ｏｄｓ液相色谱柱（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ×５ ｍ）、旋转 μ ［１－２］ 带地区，全世界有６００种以上，我国有９０余种 。山药营 蒸发仪、组织捣碎机、高速冷冻离心机。 养价值较高，富含多种必需氨基酸、维生素、多糖、皂苷元、黄 １．３　方法 ［３］ 酮等活性保健成分 。我国山药的传统加工主要以中药或 １．３．１　ＰＰＯ的提取　取新鲜山药切碎混匀，准确称取２０ｇ， 滋补品为主，近年来出现山药全粉、精粉等，加工规模与市场 加入５０ｍＬ已预冷的０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ值６．８）， ［４］ 占有量不断提高 。然而，山药加工中存在护色难题。山药 匀浆３０ｓ，４℃静置 １ｈ，减压抽滤，４℃、１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 褐变主要由酶促反应引起，多酚氧化酶（ＰＰＯ）是主要参与酶 ３０ｍｉｎ，取清液，得ＰＰＯ酶液。 ［５］ 之一 。多酚氧化酶在食品工业应用中具有积极的一面。 １．３．２　ＰＰＯ分离纯化 在茶深加工中，多酚氧化酶能催化茶多酚合成茶黄素。茶黄 １．３．２．１　硫酸铵分级沉淀　取１０ｍＬ酶液若干份，加入干燥 素是一类茶多酚氧化产物，具有抑菌、抗病毒、降血脂、防治心 硫酸铵粉末，得不同饱和度硫酸铵（１０％、２０％、３０％、４０％、 血管疾病等功效。目前，茶黄素主要从红茶中提取制备，但由 ５０％、６０％、７０％、８０％、９０％），４℃静 置 ３ｈ，４℃ 下 于红茶中茶黄素含量较低（０．２％～２％），茶黄素的实际利用 １００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，向沉淀物加入磷酸盐缓冲液３ｍＬ， 受到很大限制，因此人们不断探索新的茶黄素制备途径。有 透析２４ｈ，间隔６ｈ更换透析液。 ［６］ 研究表明，植物源多酚氧化酶合成茶黄素较为可行 ；源于 １．３．２．２　ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析　将透析后的酶液用Ｓｅｐｈ 梨和蓝莓匀浆的多酚氧化酶可以催化茶多酚生成茶黄素，茶 ａｄｅｘＧ－７５柱（１．６ｃｍ×１０ｃｍ