alregfp真核表达载体的构建 在大鼠体内的表达及其抗肝损伤作的实验研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 中文摘要的建造。四小时后，按不同注射剂量，不同注射途径，不同 中文摘要 的建造。四小时后，按不同注射剂量，不同注射途径，不同 时间点等，随机分为8组。具体分组如下：第一组：模型组； 第二组：肌肉注射pEGFP—C2．ALR，50“g／l(g；第三组：肌肉 注射pEGFP．C2．ALR， 1 OO“g／l(g； 第四组：肌肉注射 pEGFP—C2。ALR， 200IJLg／l(g； 第五组：静脉注射 pEGFP．C2．ALR， 200“g／kg； 第六组：腹腔注射 pEGFP—C2。ALR， 200¨眺g； 第七组：肌 肉注射 pEGFP—C2一ALR， 200¨眺g； 第八组：肌肉注射 pEGFP—C2一ALR， 200¨g／l(g。2～6组每12小时注射一次， 共注射4次，末次注射后1 2h断头处死动物；7～8组每1 2小 时注射一次，共注射4次，分别在末次注射后24、60小时 后处死动物。另取4只大鼠为正常对照组。动物处死后，于 肝右叶固定部位取肝组织，同时取肾组织，做冰冻切片，在 荧光显微镜下观察各组的荧光蛋白(GFP)表达情况。同时 取肝右叶组织，做石蜡切片，行衄染色，进行肝组织病理 学检查，并对肝的损伤恢复情况进行鉴定。计量资料以均数 加减标准差(夏土SD)表示，组间差异采用单因素方差分析 (ANOVA)，两两比较采甩LSD检验。等级资料采用秩和检 验。所有数据均利用SPSS 11．5软件包分析。 结果：构建的pEGFP—c2一ALR重组质粒目的基因与文献 报道的大鼠ALR cDNA编码区序列相同；大量制备的重组质 粒pEGFP—C2一ALR，提纯后再次经酶切鉴定，除可见预期的 特异性条带外，未见其他的非特异性条带，紫外分光光度计 测定OD260／OD280：pEGFP．C2．ALR为1．9；荧光显微镜下观 察各组的荧光蛋白(GFP)表达情况，各ALR治疗组均在肝 组织内有数量不等的荧光细胞出现，而且表达的融合蛋白较 中文摘要均匀的分布于整个细胞，表明 中文摘要 均匀的分布于整个细胞，表明ALR基因进入到肝细胞并获 得了有效表达。结果表明200pg瓜g ALR较50¨g爪g、1 oO¨眺g ALR的荧光细胞多，荧光蛋白表达量大；ALR不同注射途 径荧光蛋白表达量为肌肉注射静脉注射腹腔注射；不同时 间点的荧光蛋白表达量为末次注射后24小时末次注射后 1 2小时末次注射后60小时；而在肾组织未发现有荧光蛋白 的表达。光学显微镜下观察经皿染色的石蜡切片，以肝损 伤的分级标准为诊断依据。结果为，各ALR治疗组均不同 程度地减轻CCl4诱导急性肝损伤大鼠肝组织病理损害。具体 为200“g／kg ALR较50“g爪g、1 OO肛g／kg ALR恢复效果好； ALR不同注射途径恢复效果依次为肌肉注射静脉注射腹 腔注射；不同时间点的恢复效果为末次注射后60小时末次 注射后24小时末次注射后1 2小时。 结论：本研究成功构建了ALR—EGFP哺乳动物细胞表 达载体，并在大鼠肝组织内获得有效表达，通过对大鼠急性 肝损伤恢复程度的鉴定，进一步验证了ALR在体内可对CCl4 诱导的大鼠急性肝损伤有一定的治疗作用。 关键词：肝再生增强因子；基因治疗；绿色荧光蛋白； 融和蛋白；肝损伤；大鼠 英文摘要Construction 英文摘要 Construction of eukaryotic expression Vector of ALR and experiment research on acute hepatic inj ury in ratS ABSTRACT obj ectiVe：Augmenter of liVer regeneration(ALR)cloned from 1iVer of weaning rats is a noVel hepatic stimulator．It was reported that ALR mRNA eXpression was correlated with DNA syntheSis of hepatocytes aRer panial hepatectomy，and could signi矗calltly promote the surViVal rate 0f intoxicated hepatitis rats．As the speci6c mitogen，ALR could specially enhance hepatocyte proliferation and might play an important role in recoVery of liVer iI】-jury．In this study，a eukaryotic expres