AlaGln通过mTOp38MAPK信号通路介导仔猪小肠上皮细胞自噬的研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目录 1．1．2仪器与设备 ．．1 0 1．1．3试验分组与设计 ．．1 0 1．1．4试验细胞 ．．1 O 1．2试验方法 1 1 1．2．1 IPEC．1细胞培养 ．．1 1 1．2．2 MTT试验中IPEC．1细胞接种数与OD值的关系确定及生长曲线的 制定 ．11 1．2．3 MTT法检测不同浓度Ala．Gin对IPEC一1细胞活力的影响 1 1 1．2．4 Westernblot检测LC3-II、p62的蛋白表达量 ．．11 1．3统计分析 12 2结果与分析 12 2．1 IPEC．1细胞接种数与OD值关系及IPEC．1细胞生长曲线 一12 2．2Ala．Gin对IPEC．1细胞活力的影响 ．．14 2．3 Ala-Gin对IPEC-1细胞LC3一II、p62蛋白表达量的影响 一14 3讨{念 ．．1 6 3．1 MMT试验中IPEC．1细胞接种数与OD值关系及生长曲线 16 3．2Ala—Gin对IPEC．1细胞活力的影响 一16 3．3 Ala—Gin对IPEC-1细胞LC3一II、p62蛋白表达量的影响 一16 4小结 ．．17 试验二Ala-Gln调节IPEC一1细胞自噬的mTOR和p38MAPK信号通 路研究 ．．1 8 1材料与方法 19 1．1材料 ．19 1．1．1主要试剂 ．．19 1．1．2主要仪器与设备 ．．1 9 1．1．3试验分组及设计 一1 9 1．1．4试验细胞 ．．19 1．2试验方法 20 1．2．1 IPEC一1细胞培养 一20 ii 万方数据  目录 1．2．2 mTOR和p38MAPK信号通路对IPEC．1细胞活力的影响 ．20 1．2．3相应特异性抑制剂对mTOR、p38MAPK信号通路的影响 20 1．2．4 Ala-Gln调节IPEC．1细胞自噬的mTOR信号通路对细胞自噬的的影 响 ．20 1．2．5 Ala．Gin调节IPEC．1细胞自噬的p38MAPK信号通路对细胞自噬的 影响 ．20 1．3数据统计处理 20 2结果与分析 21 2．1 mTOR和p38MAPK信号通路对IPEC一1细胞活力的影响 21 2．2 Ala-Gln调节IPEC一1自噬的mTOR信号通路对自噬的的影响 22 2．3 Ala-Gin调节IPEC一1自噬的p38MAPK信号通路对自噬的影响 ．25 3讨论 ．．28 4小结 ．．3 1 试验三Ala-Gln对IPEC．1细胞mTOR信号通路下游信号分子及其相 关基因表达的影响 32 1材料与方法 33 1．1材料 ．33 1．1．1主要试剂 ．．33 1．1．2主要仪器 33 1．2试验方法 33 1．2．1细胞培养及收集 ．．33 1．2．2 Ala．Gin对mTOR信号通路相关蛋白的影响 33 1．2．3细胞总RNA的提取 33 1．2．4引物设计和合成 一34 1．2．5 eDNA合成操作步骤 34 1．2．6实时荧光定量PCR ．34 1．3数据处理及统计分析 36 2结果与分析 36 2．1 Ala．Gin对mTOR信号通路相关蛋白的影响 ．．36 万方数据  目录 2．2 Ala-Gln对mTOR信号通路中相关mRNA表达量的影响 37 2．3 Ala．Gin对p53、Bax的mRNA表达量的影响 39 3讨论 ．．40 4小结 ．．42 第三章本研究总体结论、创新点及有待进一步研究的问题 43 1全文结论 ．43 2创新点 43 3有待进一步研究的问题 43 参考文献 44 致谢 ．49 万方数据  摘要 本项目旨在应用现代营养学、细胞系模型、蛋白免疫印迹、实时荧光定量 PCR(RT-PCR)等技术手段，从细胞和分子水平探究Ala．Gln与仔猪小肠上皮细 胞自噬之间的内在关系及阐明mTOR／p38MAPK信号通路在仔猪小肠上皮细胞 自噬过程中的介导作用。研究结果将为揭示Ala．Gin调控仔猪小肠上皮细胞自噬 的作用机制提供理论依据，并为Ala-Gln在仔猪饲料中的科学应用提供理论依据。 试验一不同浓度Ala．Gin对仔猪小肠上皮细胞IPEC．1自噬的影响 试验采用单因子设计，共设有6个处理，每个处理4个重复。在体外培养的 各组IPEC．1细胞中分别添加终浓度为0、0．2、0．4、0．8、1．6、3．2mM的Ala-Gln。 采用MTT法制定IPEC．1细胞浓度标准曲线、生长曲线和检测纽胞活力及待细 胞生长到融合度到达80％．90％时收集细胞样品进行Western blot。结果表明：(1) 所有添加Ala．Gin组的细胞生存率均极显著大于对照组(尸0．01)，其中3．2mM 水平添加组细胞生存率高于对照组51．08％(P