ALVJ gp85真核表达载体构建及免疫原研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 OD PAGE PI Rτ PCR Optical dendi可 Polyacrylamide gel electrophoresis Isoelectric point Reverse transcription Polymerase chain reaction 光密度 聚丙烯酷肢凝胶电泳 等电点 反转录聚合酶链反应 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二炕基硫酸铀 SDS SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis SDS-聚丙烯酷氨凝胶电泳 TAE TEMED EB TRIS ACETATE EDTA NNNN-tetramethyl aminomethane Ethidium bromide 核酸电泳缓冲液 NNNN-四甲基氨基甲炕 澳化乙键 Tris Tris hydrochloride 三(控甲基)氨基甲炕 DMEM Dulbeccos modified eagle medium 细胞培养基 目录中文摘要 目录 中文摘要 ．I Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．III 1．引言 ．．1 1．1 ALv．J研究进展和流行现状 1 1．1．1 ALV．J分子病原学 1 1．1．2 ALv-J流行病学 ．3 1．1．3 AL、LJ致病特点 ．3 1．1．4 ALV．J临床诊断与实验室检测方法 ．4 1．1．5 ALV-J防控现状 。6 1．2真核表达系统及应用 7 1．2．1酵母表达系统及其应用 7 1．2．2真核质粒及其应用 ．．1 0 1．3本研究的意义 ．13 2．实验研究材料与方法 ．14 2．1试剂与器材 ．14 2．1．1主要试剂 ．．14 2．1．2实验地点 l 8 2．2 ALV-J gp85两种真核表达载体构建 ．．19 2．2．1目的基因引物设计与合成 19 2．2．2大肠杆菌感受态的制备 19 2．2．3两种重组克隆载体的构建与鉴定 ．．20 2．2．4两种真核表达载体的构建 23 2．2．5真核酵母系统表达目的蛋白和真核重组DNA质粒的大量制备 ．．26 2．2．6两种真核表达系统表达蛋白的鉴定 ．．28 2．3两种ALV-J gp85真核表达载体免疫原性研究 3 1 2．3．1酵母表达ALV．Jgp85目的蛋白免疫家兔制备兔抗血清试验 ．31 2．3．2两种ALV—J gp85真核表达系统制备免疫原的免疫保护性试验 ．32 2。3．3两种真核表达系统制备免疫原诱导雏鸡抗血清与ALV—J NX0101体外中和试验和抗 体的IFA鉴定 33 万方数据 万方数据 3结果 3结果 ．34 3．1 ALv-J gp85酵母表达质粒构建与其表达产物的免疫保护性分析 34 3．1．1 ALv-J gp85酵母表达载体的构建与鉴定 34 3．1．2 ALV．J gp85真核酵母表达系统表达目的蛋白的鉴定 ．．35 3．1．3酵母表达系统制备的目的蛋白免疫原性分析 一36 3．2 PVAXl一gp85 DNA质粒及免疫保护研究的分析 ．．40 3．2．1 PVAXl．gp85 DNA质粒与鉴定 40 3．2．2 PVAXl．gp85 DNA质粒在细胞中的表达与特异性分析 41 3．2-3 PVAXl．gp85 DNA质粒诱导雏鸡产生血清抗体及抗ALV感染的免疫保护作用 42 3．3雏鸡抗血清与ALV-JNX0101毒株体外中和试验和抗体的IFA鉴定 44 3．3．1雏鸡抗血清与ALV-JNX0101毒株体外中和试验 ．44 3．3．2血清中特异性抗体的IFA结果 ．．48 4．讨论 ．50 5．结论 ．52 6．创新点 52 参考文献 53 致谢 ．．59 攻读学位期间发表论文 59 山东农业大学硕士学位论文ALV-J 山东农业大学硕士学位论文 ALV-J gp85真核表达载体构建及免疫原性研究 中文摘要 利用真核表达载体制备DNA疫苗和真核重组亚单位疫苗是临床生产中防治病毒感染 的极具潜力的重要手段，能否利用它们制备出J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的具有保 护性疫苗抗原尚未见报道。 本研究利用PVAX一1载体和毕赤酵母表达系统分别构建了PVAXl一gp85 DNA表达载体 和pPIC9一gp85蛋白表达载体；对构建的PVAXl—gp85 DNA表达载体转染哺乳动物Hela 细胞和鸡成纤维细胞(CEF)，再与核酸佐剂联合免疫雏鸡，观察对血清抗体的诱导效果； 对pPIC9一gp8