ALX1诱导EMT促进肺癌侵袭和迁移的机制以及-榄香烯的逆转作用研究-中西医结合临床专业毕业论文.docx

目 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 5 二、正文 9 前言日lJ舌 9 第一部分 ALXl在肺癌中的表达研究 13 (一)材料和方法 13 1．材料 13 1．1组织标本 1 3 1．2主要试剂 1 4 1．3主要仪器 1 4 1．4主要溶液的配制 1 5 2．方法 1 5 2．1 Real time．PCR实验 1 5 2．2免疫组化实验 1 7 2．3统计学分析 1 8 (二)结果 18 1．A L X 1在人肺癌中的表达 1 8 1．1 Real time．PCR实验 1 8 1．2免疫组化分析 1 9 万方数据 2．ALXl的表达与人肺癌预后的相关性研究 2．ALXl的表达与人肺癌预后的相关性研究 20 (三)讨论 2 1 (四)结论 23 (五)参考文献 24 第二部分 构建ALXl过表达和基因沉默细胞系 28 (一)材料和方法 2 8 1．材料 2 8 1．1主要试剂 28 1．2主要仪器 29 1．3常用试剂的配置 29 2．实验方法 3 1 2．1细胞培养 3 1 2．2 Real time—PCR实验 3 1 2．3 ALXl转染H1975细胞 32 2．4 ALXl．siRNA．H460细胞的构建 35 2．5 Western blot实验 36 2．6 MTT实验 3 7 2．7免疫荧光实验 3 8 2．8统计学分析 3 8 (二)结果 3 8 1．8种肺癌细胞系中ALXl的表达 38 2．ALX 1过表达和沉默细胞模型的验证 3 9 万方数据 3．ALX 3．ALX 1促进肺癌细胞的增殖 40 4．ALX 1诱导肺癌细胞EMT 4 1 (三)讨论 4 3 (四)结论 4 5 (五)参考文献 4 6 第三部分 ALXl诱导肺癌细胞EMT的机制研究 48 (一)材料和方法 48 1．材料 48 1．1主要试剂 48 1．2主要仪器 49 2．实验方法 50 2．1 Transwell侵袭实验 50 2．2 Transwell迁移实验 50 2．3 Real time．PCR实验 50 2．4 Western blot实验 50 2．5荧光素酶实验 5 O 2．6统计学分析 5 1 (二)结果 ．． ．5 1 1．ALXl促进肺癌细胞的侵袭和迁移 5 1 2．ALXl通过Snail诱导肺癌细胞的EMT 53 3．沉默Snail阻断ALXl诱导的肺癌细胞的EMT和 侵袭迁移增强 5 5 万方数据 (三)讨论 (三)讨论 5 7 (四)结论 5 9 (五)参考文献 60 第四部分 p．榄香烯逆转ALXl诱导肺癌细胞EMT的 机制研究 ．63 (一)材料和方法 64 1．材料 64 1．1主要试剂 64 1．2主要仪器 65 2．实验方法 65 2．1 MTT实验 65 2．2 Transwell侵袭实验 65 2．3 Transwell迁移实验 65 2．4 Western blot实验 66 2．5免疫荧光实验 66 2．6统计学分析 66 (二)结果 6 6 1．p-榄香烯抑制ALXl过表达肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移 66 2．D一榄香烯对ALXl诱导的肺癌细胞EMT的逆转作用 68 3．p一榄香烯逆转ALXl诱导的EMT的分子机制 69 (三)讨论 69 (四)结论 7 1 万方数据 (五)参考文献 (五)参考文献 72 总结 77 三、综述 79 (一)综述 7 9 (二)参考文献 8 7 四、攻读学位期间发表论文情况 96 五、致谢 97 万方数据 大连医科大学博士学位论文ALXl诱导EMT促进肺癌侵袭和迁移的机制以及p一榄香烯的 大连医科大学博士学位论文 ALXl诱导EMT促进肺癌侵袭和迁移的机制以及p一榄香烯的 逆转作用研究 博士生姓名： 姚娓 指导教师： 邹丽娟教授 专业名称： 中西医结合临床 摘要 第一部分ALXl在肺癌中的表达研究 目的：比较ALxl在肺癌组织中表达差异情况，揭示ALXl表达水平与肺癌恶 性程度以及预后的关系。 方法：通过Real time．PCR实验考察47例肺癌组织和癌旁组织样本中ALxl mRNA的表达水平；利用免疫组织化学实验考察发生淋巴结转移的肺癌组织和未转 移的肺癌组织中ALXl蛋白的表达水平；利用Kaplan．Meier生存分析研究ALXl 的表达水平与肺癌病人的预后情况。 结果：1．47例肺癌组织均表达ALXl，且显著高于癌旁组织样本中ALXl mRNA 的表达水平。2．47例肺癌组织中，发生淋巴结转移的肺癌组织的ALXl mRNA的 表达水平显著高于未转移的肺癌组织。3．免疫组化分析显示，发生淋巴结转移的肺 癌组织中ALXl阳性细胞比例要显著高于未转移的肺癌组织中ALXl阳性细胞的比 例。4．ALXl表达水平较低