Asnrp1基因在中国卤虫胚胎发育和抗逆过程中的表达模式.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 要 中国卤虫(Artemia sinica)广泛分布于高盐水域中。盐度、温度以及溶解氧都是卤 虫生存的重要环境因子。卤虫具有较强的抵抗极端环境的能力，并且在高盐、低温等条 件下，可产出休眠卵来应对长期恶劣的环境。 NURPl(Nuclear Protein 1)是重要的小分子应激相关蛋白，在卤虫滞育方面发挥重 要的作用，具有复杂的表达调节方式和多种细胞功能。但对nurpl在中国卤虫胚胎发育 过程中的基因表达模式及其在抗逆方面的研究还未见报道，有待于进一步深入细致的研 究和分析。 本研究采用RACE技术对中国卤虫As—nuprl基因进行克隆，得到了568bp的 As—nuprl基因序列全长。As．nuprl eDNA包含198bp的开放阅读框，42bp的5’非编码区 和328bp的3’非编码区。使用ClustalX2．0和MEGA4．0软件对推测的氨基酸序列和相近 蛋白的氨基酸序列进行分子进化分析，使用在线分析软件对As．nuprl基因的推测蛋白的 氨基酸序列进行了分析。该NUI冲1推测蛋白包含66个氨基酸，含有bHLH结构域和一 个核定位序列，分子量为7．9kD，理论等电点为10．34。NURPl在长期进化过程中比较 保守。 ‘ 采用原位杂交技术对As—nuprl在中国卤虫胚胎发育过程中的表达部位进行研究，实 验结果显示As—nuprl在中国卤虫胚胎发育各个时期及虫体各个部位表达广泛。 采用实时荧光定量PCR技术对As．nuprl在中国卤虫不同胚胎发育时期、温度和盐 度胁迫实验中的表达量进行了研究。发现As．nuprl在中国卤虫胚胎发育的各时期均有表 达，但相对表达量不同。其中从卵囊收集到的胚胎的表达量比滞育后恢复胚胎发育的胚 胎中表达量高。在随后的发育中As．nuprl的表达量先呈显著下降趋势，在发育至无节幼 体阶段后才呈现逐渐上升趋势。在温度和盐度胁迫实验中，随着盐度的升高、温度的降 低，As—nuprl基因的表达量也呈逐渐升高的趋势。这些发现表明As．nurpl在对卤虫克服 外界不利环境胁迫时发挥了重要的作用，是卤虫中重要的抗逆基因，也是中国卤虫胚胎 发育过程中的重要调控基因，是重要的胚胎保护因子。研究As．nuprl基因在卤虫胚胎发 育和抗逆过程???表达对研究卤虫滞育的分子机制具有重要的理论意义，同时对进一步开 发利用卤虫资源具有一定的应用价值。 关键词：As-nurpl；卤虫；表达模式；胚胎发育；应激  As-nuprl基因在中国卤虫胚胎发育和抗逆过程中的表达模式 Expression Pattern ofAs-nurpl Gene during Embryonic Development and in Response to Stress from Artemia Sinica Abstract Artemia sinica is widely distributed in hypersaline waters．Salinity，temperature and dissolved oxygen are important environmental factors for Artemia．The ability ofArtemia to resist extreme environment stress is very strong，and the Artemia cysts call survive long—term under harsh conditions ofhigh salinity and low temperature．． NURP 1(Nuclear protein 1)，an important stress-related protein with small molecular mass，is closely related to diapause in the development of Artemia，and the expression regulation of nurpl is complex with diverse biological functions．But little studies on the distribution and expression pattern of nurpl during embryonic development and in response to stress are investigated，more thorough studies need US to fi