Annexin A7小鼠肝癌淋巴道转移潜能相关性分析.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期：逊年上月i望日 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构 送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论 文。 论文作者签名．立垄缝指导教师签名：—牲 签字日期：-)华—妒拗日 Annexin Annexin A7与小鼠肝癌淋巴道转移潜能相关性研究 博士研究生：王志强 指导教师：唐建武 教授 专业名称： 病理学与病理生理学 摘 要 背景：转移是恶性肿瘤患者死亡率高、预后差的根本原因。恶性肿 瘤的区域性淋巴结转移是影响上皮来源恶性肿瘤患者预后的最重要因 素。研究并最终弄清楚恶性肿瘤淋巴道转移的机制，在此基础上发展出 有效的干预手段，对于提高恶性肿瘤患者的生存率有重要意义。 Hea．F和Hea．P是利用可移植性小鼠腹水性肝癌细胞(H22)接种于 有正常免疫功能的6l 5小鼠足垫，经多次淋巴系统筛选得到的两个来源 于同一亲本细胞但淋巴道转移能力明显不同的细胞株。其中Hca．F是具 有高转移潜能的细胞株，淋巴结转移率高于70％：Hca．P是低转移潜能 的细胞株，淋巴结转移率低于30％。两株细胞主要差异集中在淋巴道转 移表型上。 在本研究组此前针对Hca．F细胞和Hca．P细胞的系列研究中，利用 抑制性消减杂交技术及高通量基因芯片技术筛选出了在Hca．F细胞和 Hea．P细胞的差异表达基因；并采用定量蛋白质组学技术建立了高低淋 巴道转移力小鼠肝癌细胞荧光差异蛋白表达图谱，经质谱鉴定得到l 7个 蛋白质，其中膜联蛋白7(Annexin A7)在Hca．F细胞中的表达高于Hea。P 细胞，提示Annexin A7可能与小鼠肝癌的淋巴道转移潜能相关。由于在 人类组织细胞中也有Annexin A7同源蛋白，我们认为研究小鼠肝癌 Annexin A7与淋巴道转移机制的相关性，对人类肝癌淋巴道转移的的防 治有重要意义。由此确定以Annexin A7为研究对象，探索其在Hea．F细 胞株淋巴道转移过程中的作用，经检索，国内外未见同样的研究报道。 目的：①构建pcDNA3．1．Annexin A7表达载体，稳定转染Hca．P细 胞并获得Annexin A7的表达水平显著上调的Hca．P细胞株，同时建立稳 定转染pcDNA3．1空载体的Hea．P细胞株作为对照。②构建pSilencer 3．1．shRNA表达载体，稳定转染Hea．F细胞并获得Anncxin A7的表达水 平显著下调的Hca—F细胞株，同时建立稳定转染pSilencer 3．1空载体的 l Hca． Hca．F细胞株作为对照。③解析Annexin A7表达水平的改变对小鼠肝癌 细胞株Hca．F和Hca．P在细胞周期、细胞凋亡、细胞移动和侵袭能力等 方面的影响，由此确定Annexin A7表达水平与小鼠肝癌细胞淋巴道转移 潜能间的关系。 方法：①利用Annexin A7编码序列(coding sequence，CDS)和 PcDNA3．1(+)质粒经BamH I和EcoR I双酶切后连接纯化回收，抽提 获得pcDNA3．1．Annexin A7质粒，并行PCR鉴定(鉴定引物为：5-TGT CTAACCGTTCCAATGACC一3’， 5’一ACTAGAAGGCACAGTCGAGGC·3’ 这对引物扩增片段包含pcDNA3．1和Annexin A7序列各一部分，长度为 923bp，)。在确定pcDNA3．1．Annexin A7质粒构建成功后行测序鉴定(引 物： 5’．CTCACTATAGGGAGACCCAAGC一3’和 5’-ACTAGAAGGCACA GTCGAGGC．3’)，以确定表达载体中Annexin A7序列无误。将 pcDNA3．1．Annexin A7表达载体转染Hca．P细胞，并用含400ug／ml G4l 8 的完全培养基筛选，获得稳转pcDNA3．1．Annexin A7表达载