ANXA7调控核心岩藻糖基化白质HnRNP A2B1 PDLIM1 RBM4表达及HnRNP A2B1对肿瘤生物学行为的影响.docxVIP

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2018-12-22 发布于福建
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ANXA7调控核心岩藻糖基化白质HnRNP A2B1 PDLIM1 RBM4表达及HnRNP A2B1对肿瘤生物学行为的影响.docx

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ANXA7调控核心岩藻糖基化白质HnRNP A2B1 PDLIM1 RBM4表达及HnRNP A2B1对肿瘤生物学行为的影响

优秀毕业论文精品参考文献资料目目录一、摘要．1 (一)中文摘要 1 (--)英文摘要 4 二、正文 8 (一)日!I舌 8 (二)材料和方法 9 1．材料．．9 1．1动物和细胞．．9 1．2实验仪器和试剂．9 2．方法．．11 2．1细胞培养．1 1 2．2构建载体和验证．．1 1 2．3稳定细胞转染 1 3 2．4实时荧光定量PCR 一14 2．5蛋白质免疫印迹 16 2．6 CCK8细胞增殖实验．．16 2．7 Tran swell细胞迁徙实验 1 7 2．8Tran swell细胞侵袭实验 l 7 2．9统计学分析 1 8 万方数据 (三 (三)结果 18 I．构建ANXA7目的基因表达载体．．19 2．稳定转染shRNA-ANXA7细胞、N卜Control细胞、pcDNA-ANXA7胞、 pcDNA3．1细胞、shRNA-HnRNP A2／B1细胞、N2一Control 细胞．．20 3．shRNA-ANXA7细胞、NI-Control细胞、pcDNA—ANXA7胞、pcDNA3．1 细胞中HnRNPA2／BI、PDLIMI、RBM4、ANXA7基因的表达情况 2l 4．shRNA-ANXA7细胞、N1一Control细胞、pcDNA-ANXA7胞、pcDNA3．1 细胞中HnRNPA2／B1、PDLIMl、RBM4、ANXA7蛋白质的表达情况 23 5．稳定转染shRNA—HnRNPA2／Bl和N2-Control细胞，检测HnRNPA2／B1 基因及蛋白表达水平的变化．．26 6．CCK8实验检测HnRNPA2／B1下调对Hca．P细胞增殖能力的影响．27 8．Tran swell实验检测HnRNPA2／B1下调对Hca．P细胞迁徙能力的影响 28 9．Tran swell实验检测HnRNPA2／B1下调对Hca-P细胞侵袭能力的影响．29 (四)讨论 30 (五)结论 32 (六)参考文献 34 三、结进 37 (一)综述．．37 万方数据 (二 (二)参考文献．4 1 五、攻读学位期间发表文章情况 44 六、致谢 45 万方数据大连医科大学硕士学位论文ANXA7 大连医科大学硕士学位论文 ANXA7调控核心岩藻糖基化蛋白质HnRNP A2／B1 PDL I M1、RBM4表达及HnRNP A2／B1对肿瘤生物学行为的影响硕士生姓名：陈丽娜指导教师：唐建武专业名称：病理学与病理生理学摘要背景： Hca—P细胞和Hca—F细胞是本课题组通过将同-d,鼠腹水型肝癌细胞不断接种615小鼠足垫，而筛选并分离出高低淋巴道转移潜能不同的两个亚克隆细胞株，其中Hca—P细胞淋巴结转移率30％，为低淋巴道转移细胞，Hca-F细胞淋巴结转移率70％，为高淋巴道转移细胞。在前期研究中，我们发现Hca-F细胞中 ANXA7 mRNA的表达是Hca—P细胞中的3．48倍，Hca-F细胞中ANXA7蛋白质的表达是Hca-P细胞中的3．0倍，且ANXA7表达下调后，小鼠肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力均减弱，同时可促进凋亡。提示ANXA7可能是决定肝癌细胞淋巴道转移潜能的关键基因之一。核心岩藻糖基化是蛋白质翻译后修饰的一种，其水平的异常表达与恶性肿瘤的发生密切相关，Fut8(a-1，6岩藻糖基转移酶移)是催化核心岩藻糖合成唯一的糖基转移酶，GDP-岩藻糖是核心岩藻糖基化过程中的底物之一。在高尔基体内Fut8催化岩藻糖残基从GDP一岩藻糖转移至乙酰氨基葡萄糖 (GIcNAc)或更复杂的N聚糖中，构成核心岩藻糖。研究发现，ANXA7包含有胰岛素、Ca2+以及磷脂结合位点，参与介导Ca2+／GTP信号通路，相当于激活的GTP酶。所以，研究ANXA7与核心岩藻糖基化蛋白质之间的相互关联对探讨肿瘤的发生机制有重要作用，可为临床应用提供新的治疗思路。目的：本实验通过细胞转染、Western Blot、qRT—PcR等技术，对比观察过表达和下调小鼠肝癌Hca-P细胞ANXA7基因调控对HnRNP A2／B1、PDLIMl、RBM4基因及蛋白表达水平的影响，进而分析ANXA7与核心岩藻糖基化蛋白质之间的作用关系。通过细胞转染、Western Blot、qRT-PCR、CCK-8、Transwell小室等实验，观察HnRNP A2／B1基因对Hca-P细胞生物学行为的影响。方法：1、构建PG—CMV—EGFP-Kan／neo-ANXA7表达载体，稳定转染至Hca—P细胞，万方数据大连医科大学硕士学位论文获得大连医科大学硕士学位论文获得ANXA7过表达的Hca—P细胞株；构建pGPU6-GFP-neo—shRNA-ANXA7表达载体，稳