Aβ蛋白对神经干细胞增殖 分化及凋亡的影响以及激小胶质细胞a7nAChR对神经干细胞的保护作用.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 南方医科大学 硕士学位论文 Aβ蛋白对神经干细胞增殖、分化及凋亡的影响以及激活小胶质 细胞a7-nAChR对神经干细胞的保护作用 姓名：兰艳纤 申请学位级别：硕士 专业：药理学 指导教师：李金恒；王勇 ＼_＼嗍嬲 Ap蛋白对神经千细胞增殖、分化及凋亡的 影响以及激活小胶质细胞0【7．nAChR对神经 干细胞的保护作用 研究生：兰艳纤 指导教师：李金恒教授王勇教授 摘要 阿尔茨海默病(Alzheimer’S disease，AD)是一种常见的慢性、进行性中枢 神经系统(central nerve system，CNS)退行性疾病。其临床主要表现为进行性 的记忆衰退和认知功能的下降，行为异常和社交障碍，通常病情呈进行性加 重。主要病理特征表现为脑神经细胞外伊淀粉样蛋白(beta．amyloid protein， 邶)沉积形成老年斑，脑神经细胞内tau样蛋白异常聚集形成神经纤维缠结 (neurofibrillary tangles，NFT)。随着全球人口老龄化的快速发展，AD的发病 率正日益增高，已成为继冠心病、肿瘤、中风之后危及老年人生命的第四大病 因。由于对AD的病因和发病机制的认识尚不清楚，在治疗方面存在极大的困难， 目前还没有根治的方法，所以如何预防和治疗AD己成为世界所关注的问题。 神经干细胞(neural stem cells，NSCs)是指CNS中具有无限增殖能力和 多向分化潜能的细胞，可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。当 CNS中神经细胞发生变性或死亡时，其内源性NSCs通过增殖、迁移、分化 加以补充修复，为促进CNS再生提供种子细胞。但通过迁移外源性NSCs治 疗AD并不理想。其原因可能是除NSCs本身的质量问题外，更重要的可 能是AD患者颅内微环境发生改变，不适合NSCs生存和潜能的发挥。 近年来，国内外大量的研究表明AD的发生、发展与中枢炎症有关。认为AD  摘要 是AB沉积引起的继发性慢性炎性反应，也是导致胆碱能神经元退行性变的 重要原因。参与CNS炎性反应的细胞主要有小胶质细胞和星形胶质细胞， 有文献报道其激活后可释放多种细胞因子、趋化因子、补体及其激活物，导 致非特异性炎性细胞浸润，产生慢性炎症，破坏了脑内NSCs增殖和分化的 环境，造成来源于“神经细胞库”中的NSCs或者移植NSCs不能发挥正 常的功能，使其增殖、分化功能受抑，或迁移能力减退，从而导致丢失 的神经细胞得不到及时补充。那么，明确A夕介导的炎性反应能否造成 NSCs失能以及削弱炎性反应能否改善NSCs生存环境，促进其增殖、分 化能力，减少其凋亡的研究就具有非常重要的意义。 如何有效控制邶引起的颅内炎症，改善NSCs生存环境?有研究显 示迷走神经释放的递质激活巨噬细胞上的烟碱型乙酰胆碱受体 (a7一nAChR)后，能抑制外周炎性反应。在CNS中，虽然缺乏外周巨噬 细胞，但有巨噬样的小胶质细胞和星形胶质细胞参与AB介导的炎性反应， 我们前期研究已经证明这些细胞上都有a7．nAChR表达，A13在体外可诱导 星形胶质细胞1L．6、1L．113、TNF．a和趋化因子MIP．1、RANTES增加；也可 诱导小胶质细胞分泌1L．6、1L．1p、TNF．Ⅱ增加，激活小胶质细胞和星形胶质 细胞a7-nAChR可削弱AD对P38MAPK、P42／44MAPK通路的激活，调控炎性 细胞因子和趋化因子的生成和分泌，使Ap介导的这些炎症因子的生成和分泌降 低，其中激活星形胶质细胞a7．nAChR，对趋化因子的削弱作用最为明显，激活 小胶质细胞a7一nAChR，对炎性因子的分泌有明显的抑制作用。那么，激活小胶 质细胞a7．nAChR是否能改善AB蛋白介导的NSCs生成的微环境，这一假设亟 待研究。 基于上述研究，本课题首先利用无血清悬浮培养法从新生大鼠海马中培养 出高纯度、高活力的NSCs：在体外建立细胞炎性反应模型，观察A13蛋白对NSCs 增殖、分化、凋亡的影响；然后利用transwell共培养小胶质细胞和NSCs，并通 过激活小胶质细胞a7．nAChR，探讨小胶质细胞a7．nAChR激活在Ap蛋白介导 n  硕士学位论文 的神经干细胞生成中的作用，为寻求AD的治疗靶点提供实验基础。 方法 1．NSCs分离培养及鉴定 取出生24h内SD大鼠，75％酒精浸泡5min，无菌条件下，取出大脑，剥 离脑膜和血管，显微镜下分离海马组织，用眼科剪剪碎，吸管轻轻吹打；以0．125％ 胰酶37℃消化15min，以含10％FBS的DMEM／F12终止消化，1000转／分， 离心5min，弃上清；用含20ng／ml EGF(epidermal growth factor)、20ng