AβcFos和SUMO1在海马表达的影响.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 复旦大学硕士论文 复旦大学硕士论文 A13对c．Fos和SUMO．1在海马表达的影响 中文摘要 阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是以智能衰退为主要表现的神经系统 退行性疾病。AD的主要病理特征为脑内分布有由大量的p．淀粉样蛋白 (D．amyloid，A11)沉积形成的老年斑(senile plaque，SP)、神经元内高度磷酸化tau 蛋白聚集形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle)、神经元营养障碍、神经 元的大量丢失、突触的损害和丢失。目前AD的病因尚不清楚，但AD神经毒 性被认为是各种因素引起AD的共同通路Ilj。本实验分别在AD转基因鼠和在 脑内注入AD的SD大鼠动物模型上探讨AD对c．Fos和小泛素相关修饰物(small ubiquitin．mimed modifer,sumo．1)在海马内表达的影响。主要研究结果如下： 第一部分：A13诱导c．Fos的表达： 1．免疫组织化学检测显示12月龄APPswe／PSlAE9AD转基因鼠脑内有大 量的p一淀粉样蛋白沉积形成的斑块。同12月龄野生型小鼠相比，Fos蛋白表达 显著增加，Fos免疫阳性染色主要分布在海马CAl．4区的锥体细胞层、齿状回、 丘脑、下丘脑等部位的神经元胞核内。 2．SD大鼠背海马内注入不同剂量的ADl-40，免疫组化检测显示：在3小时 2nmol组Fos蛋白被诱导表达最多，Fos阳性的神经元主要分布在海马CA3／4 区的锥体细胞层、齿状回门区内和颗粒细胞层，以CA3／4区和门区内最为明显。 0．02nmol和0．2nmol组在海马齿状回门区内以及颗粒细胞下层可见散在的Fos 阳性细胞核染色。2nmol组Apl-40注射6小时后的Fos蛋白表达同生理盐水对 照组无明显差异。 3．SD大鼠海马内分别注射2nmol的Alll-28和All25．35后3小时，免疫组织 化学结果显示海马齿状回的颗粒细胞层下部及其门区内，以及CA3区的锥体 细胞层可见Fos表达增加，但不如注入2nmol Alll-40组明显。A1125-s5诱导Fos 表达的效应较Alll-28强。 4．SD大鼠侧脑室内分别注射O．02、0．2、2nmol Alll-40后3小时，也可见在 齿状回门区内和颗粒细胞层下部以及CA3区Fos阳性染色。注射海人藻酸 (KainicAcid，KA)3小时诱导的Fos高表达，主要分布于CA区锥体细胞层和 齿状回颗粒细胞层的神经元，其中CA3区表达相对较弱，6小时后Fos表达减 弱。而同时注射All或用丫．分泌酶抑制剂阻止Ap形成，可影响KA诱导的Fos 复旦大学硕士论文 A13 复旦大学硕士论文 A13对c·Fos和SUMO-1在海马表达的影响 在海马表达的分布模式。 5． SD大鼠海马内注入2nmol的Apl．40后观察到海马内神肽Y (neuropeptide Y NPY)的分布减少。免疫荧光双标Fos与NPY的结果显示：Fos 与NPY的有部分共存，但Apl-40作用后Fos染色增加，NPY染色减弱， Fos 与NPY的共存细胞减少。 第二部分：AB对脑内SUMO．1表达和分布的影响： 1．免疫组织化学和Western．blot检测显示：12月龄APPswe／PSlAE9 AD 转基因鼠脑内SUMO．1表达较同月龄的野生型小鼠增加；转基因鼠海马 SUMO．1阳性染色的部位主要为神经纤维分布的部位，包括苔状纤维，齿状回 的颗粒细胞层外的分子层，而颗粒细胞层和锥体细胞层的胞体部位染色浅；皮 层沉积老年斑内也可见SUMO．1的免疫阳性染色。12月龄野生型鼠SUMO．1 在锥体细胞层淡染，颗粒细胞层较周围分布有神经纤维的部分染色更浅。 2．SD大鼠海马内注射AD，在不同的时间点应用ABC法检测SUMO．1表 达和分布。结果显示：注入单体可溶性A131．40后，SUMO．1在海马CA区锥体 细胞层的表达随着时间的延长逐渐增加，在7天时表达最多；在注射纤维状 ADl-40后注射部位附近的CAl区神经元有SUMO．1阳性染色，在7天时可以观 察到在注射部位周围类似瘢痕组织的结构附近有较多的SUMO．1阳性纤维。同 时也观察到在注射后的不同时间点皮层内有散在的团块状SUMO．1阳性染色。 3．昆明鼠的冷水应激后观察到Ap免疫荧光染色增强。免疫组化和Western ．blot技术检测显示，在应激12小时后脑内SUMO．1表达显著增加。正常动物 SUMO．1主要分布在海马锥体细胞和齿状回内颗粒细胞的胞体，但染色较淡； 在应激后海马脑片SUMO．1染色显著加深，免疫阳性物质主要分布在海马