2013苏教版选修1第二节《分子生物学技术》.pptVIP

* 从基因组中分离目的基因在细胞中克隆 * 筛选含有重组DNA的细胞——细胞克隆（cell clone） * 筛查含有目的基因的细胞克隆 * 四、目的基因表达 上述细胞的克隆系统可直接导入的目基因扩增，获得足够量的目的基因来进行结构与功能的研究。 重组DNA技术的另一目的是获得基因重组后的产物——RNA，蛋白质。 就是将目的基因与表达载体重组，导入宿主细胞进而表达出相应的基因产物（蛋白）。如胰岛素，干扰素；生产疫苗的抗原和特异的抗体等。此类克隆系统称为表达克隆。（expression cloning）. * 目的基因表达 * （一）．真核细胞的基因在原核细胞（细菌）中表达  原核细胞中缺乏真核基因表达装置（如，RNA剪接因子等），因此不能直接表达。通常采用大肠杆 菌为宿主。 真核多肽的表达要求： 1）适当的cDNA（完整的编码序列）； 2）适当的表达载体，提供特定多肽信息； 3）外部进行表达调控，表达系统设计有启动子。? 产物特征： 1）真核细胞的蛋白由于不能羟基化而不稳定； 2）活性受限或无活性。 * (二)、真核细胞基因在真核细胞中表达 真核宿主细胞提供一个相似但又不相同的环境。常采用酵母或昆虫细胞作为宿主。 应用于真核细胞蛋白质的大量制备，研究特定基因的表达。 产物翻译后羟基化，羧基化等，