高迁移率族蛋白B1在肾间质纤维化中作用的研究-内科学(肾脏病学)专业论文.docxVIP

2011 2011 届硕士研究生毕业论文 高迁移率族蛋白 B1 在肾间质纤维化中作用的研究 PAGE PAGE 10 高迁移率族蛋白 B1 在肾间质纤维化中作用的研究 研究生：赵延娜 导 师：朱春玲教授 专 业：内科学（肾脏病学） 摘要 目的：1.探讨高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)在肾小管间质纤维化大鼠模型中的表达及 意义；2.探讨肾炎舒对肾小管间质纤维化的影响及可能的作用机制。 方法：采用单侧输尿管结扎术(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)致肾小管 间质纤维化大鼠模型。将 36 只大鼠随机分为假手术组、模型组、肾炎舒治疗组 (378mg/kg/d)，手术后第 7 天、第 14 天分别处死各组中 6 只大鼠。行 HE 染色后 进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度，用免疫组化方法观察各组大鼠组织 中 HMGB1、转化生长因子-? 1(TGF-? 1)的表达情况。 结果：模型组各时间点 HMGB1、TGF-? 1 的表达及肾小管间质损伤指数明显高于同 期假手术组(p0.05)；而肾炎舒治疗组各时间点 HMGB1、TGF-? 1 的表达及肾小管 间质损伤指数明显低于模型组(p0.05)。 结论：UUO模型中，HMGB1可协同TGF-β1的促纤维化作用，对肾间质纤维化有促进 作用；肾炎舒胶囊可抑制肾组织中HMGB1及TGF-? 1的表达，可能对肾间质纤维化 有一定的防治作用。 关键词：高迁移率族蛋白B1；转化生长因子-? 1；输尿管梗阻；肾炎舒 前言 慢性肾脏病(CKD)患者约占世界总人口 10％[1]。全球人口老龄化以及糖尿病、 高血压、肥胖等疾病发病率的持续增高导致 CKD 发病率逐年上升。肾纤维化是 CKD 发展至终末期的最终结果，包括肾小球硬化和小管间质纤维化(RIF)。以往人们认 为肾功能减退是由于肾小球病变所致。然而，自 1970 年 Schainuch 提出肾小管 间质(TI) 损害与肾功能减退呈显著相关的观点以来，肾小管间质损害正日益得到 重视。大量的动物实验和临床研究表明，肾小球疾病的发展和预后与肾小管间质 的病变程度密切相关，肾小管间质纤维化程度是反映肾功能下降严重程度和判断 预后最重要的指标。因此，对肾小管间质纤维化机制的研究对于慢性肾衰竭的防 治有重要意义。而在已知研究中，转化生长因子β1（TGF-β1）与肾间质纤维化 具有密切联系，不论何因，TGF-β1 是导致纤维化的最后共同中介物，因此 TGF- β1 成为治疗肾脏纤维化的一个公认治疗靶点。 高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)是哺乳动物体内一种重要的分子，分布极其广泛。 长期以来，HMGBl 被认为是典型的非组蛋白，参与核小体结构的构建及稳定，并可 结合某些转录因子从而参与基因转录及 DNA 重组、修复和复制。而近年的研究表 明 HMGB1 还可表达于细胞膜上或释放于细胞外参与某些细胞的分化、迁移、再生， 并可介导炎症反应，尤其近期发现其是致死性全身性炎症反应的晚期介导因子而 备受关注。目前国内已有相关文献报道其与肝、肺纤维化具有密切联系[2，3]，但在 肾间质纤维化中国内尚未见相关研究报道。 单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型（UUO模型）是一种研究RIF发生机 制、肾脏细胞转分化和评价RIF治疗方法的理想模型[4]，其方法简便，病变均一， 有较好的重复性[5]。 肾炎舒是一种临床常用药，有抗炎、促进炎症恢复作用，可减轻肾小球肾炎 的病理改变，促进病变恢复，临床上常用于治疗急慢性肾炎，取得了较好的疗效， 但是其在RIF中的作用尚未见有报道。故在本实验中，采用UUO模型，选用肾炎舒 作为治疗组，观察肾间质HMGB1及TGF-β1表达的变化，探讨它们与肾小管间质损 伤、肾间质纤维化的关系及其之间可能的相互作用以及肾炎舒对肾间质纤维化是 否具有延缓作用及其可能的作用机制。 1. 动物模型及分组 1.1动物分组 材料与方法 36只雄性成年SD大鼠（清洁级，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供， 许可证号SCXK(渝)2007-0005），体重180-220g，适应性饲养一周后随机分为3组， 每组12只：假手术组（S组）、模型组（U组）、治疗组（T组），每组并随机分为 S7、S14，U7、U14，T7、T14两个亚组分别于术后7天、14天处死。手术后第一天开始， T组予肾炎舒按378mg/kg予以灌胃，每天一次[6]，S组及U组以等量生理盐水予以灌 胃。 1.2动物模型 单侧输尿管结扎术（unilateral ureteral obstruction,UUO）致肾小管间质 纤维化模型。手术方法如下：10%水合氯醛（3ml/kg）腹腔注射麻醉，待麻醉生效 后将大鼠固定，取左侧腹部为手术切口，去毛备皮，打开腹腔暴