虎纹捕鸟蛛毒素.I天然突变体的.PDFVIP

2005年 9月 湖南师范大学 自然科学学报 Vo1．28 No．3 第 28卷 第 3期 Journal ofNaturalScienceofHunanNormal University Scp．，2005 虎纹捕鸟蛛毒素．I天然突变体 的 分离纯化与鉴定 何小珍，胡卫军，曹 税 ，王贤纯，梁宋平 (湖南师范大学生命科学学院 蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室，中国长沙 410081) 摘 要 通过离子交换及反相HPLC，从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到一种虎纹毒素一1天然突变体 ，MALDI—TOF 质谱仪分析表明该多肽天然突变体分子量为3636Da．EdlTlan测序结合串联质谱和氨基酸组成分析鉴定出该天然 突变体的序列为H2N—ACKGVFDACTPGKNECCPNRVCSDKHKWCKWQ．COOH．其中6个 Cys形成 3对二硫键．小鼠 脑室注射实验表明，该天然突变体能使小 鼠致死，但不能阻断小鼠膈神经一膈肌标本的神经肌肉接头传递．本研究 结果表明，K32残基对于HWTX—I的生物学活性有关键性作用． 关键词 天然突变体；虎纹捕鸟蛛毒素一I；虎纹捕鸟蛛 中图分类号 Q51 文献标识码 ： A 文章编号 1000—2537(2005)03．0076—04 Purificationand IdentificationofaNaturaIMutantof Huwentoxin—IfrOm theVenom 0fOrnithoctonushuwena HEXiao-zhen，HUWei-jun，CAORui，WANGXian-chun，HANGSong-ping (KeylabofProteinChemistryandDevelopmentalBiology，CollegeofLifeScienceofHunanNormalUmversity，Changsha410081，China) Abstract AnaturalmutantofHuwentoxin．1 waspurifiedandidentifiedfrom thevenom ofthespiderOmithoto． tubshuwena byionexchangechromatographyandl~veIsedphaseHPLC．rn1emolecularweightofthemutantis3636Da determinedbyMALDI．ToFmassspectrometryand theaminoacidsequenceiSH2N．ACKGV FDACT PGKNE CCPNR VCSDKHKWCKWQ．COOHdeterminedbyEdmandegradationincombinationwithtandemmassspectrometryandam ino acidcompositionanalysis．ThesixCysresiduesinthemutantform thFeepairsofdisulfidebridge．Th enaturalmutantcan causethedeathofadultmouseafterinwacerebroventricularinjeetionbutcannotblocktheneuromusculartransmissionof theisolatedmousephrenicnerve·diaphragm preparation．ThisresultindicatesthattheresidueK32isoneofthekeyresi． duesrelated tothebiological activityofHWTX．1． Keywords naturalmutant；HWTX．I：Ornitlmctomushuwena 蜘蛛毒液成分较多，不同种蜘蛛的毒液的成分不同，主要的成分为蛋 白质 、多肽、多胺类神经