布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测方法建立.PDFVIP

微生物学通报 Dec. 20, 2017, 44(12): 2822−2829 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170482 研究报告 布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测方法的建立 1,2Δ 1,2Δ 1 1 1 1* 1* 孙翠丽 程汝佳 张阁 程君生 朱良全 蒋卉 丁家波 (1. 100081) (2. 271018) 摘 要：【目的】布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病，是由布鲁氏菌引起的以感染家畜为主的人 畜共患传染病，造成严重的公共卫生问题。目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免 疫相结合，所以建立快速准确的诊断方法对防治和清除布病非常必要。本文建立布鲁氏菌病荧 光偏振(FPA)抗体检测方法，为布鲁氏菌病(布病)的快速高效诊断提供技术手段。【方法】提纯 猪种布鲁氏菌 S2 株脂多糖 O 链(OPS) ，经异硫氰酸荧光素(FITC)标记后作为诊断抗原。通过对 样品稀释液、抗原稀释度、反应时间等条件的优化，初步建立了布鲁氏菌荧光偏振诊断方法。 用该方法对 148 份布病阳性血清(其中牛血清 70 份，羊血清 78 份)和 155 份布病阴性血清(其中 牛血清 82 份，羊血清 73 份)进行检测，确定其敏感性和特异性。按确定的技术参数，制备 3 批 布鲁氏菌 FPA 抗体检测试剂盒，使用质控阴、阳性血清分别评价试剂盒的批内和批间重复性。 用 400 份临床样本比较本研究开发试剂盒与商品化进口 FPA 试剂盒的符合率。【结果】使用 0.5%蔗糖磷酸缓冲液作为血清样品稀释液；标记抗原的使用浓度为 90 μg/mL；最佳反应时间 为 3−5 min。本检测方法的判定标准为：δmP 值20 时为阴性，δmP 值≥20 时为阳性。按上述 条件建立的 FPA 检测 148 份布病阳性血清和 155 份布病阴性血清，结果敏感性为 98.6% ，特异 性为 98.7%。对 400 份临床样本的比对检测显示，研究建立的 FPA 方法与进口商品化试剂盒的 总符合率为 94.0%。【结论】研究建立的布鲁氏菌PFA 抗体检测方法具有良好的特异性和敏感 性，可作为一种重要的布病诊断快速诊断方法。 关键词：布鲁氏菌，荧光偏振诊断方法，特异性，敏感性 Foundation item: National Key Research and Development Program of China (No. 2016YFD0500902) *Corresponding authors: Tel: 86-10 E-mail: JIANG Hui:163.com; DING Jia-Bo: dingjiabo@126.com These authors equally contributed to this work Received: July 03, 2017; Accepted: October 30, 2017; Published online () : November 01, 2017 基金项目：(No. 2016YFD0500902) *通讯作者：Tel 86-10 E-mail163.comdingjiabo@126.com  收稿日期：2017-07-03 接受日期：2017-10-30 优先数字出版日期() ：2017-11-01 :