基于SpA定向修饰的金3DNEEs的AFB1无标记免疫传感分析-化学工程与技术专业论文.docxVIP

Classified Index: O657.1:TP212.3 U.D.C: 544.6:57 Dissertation for the Master Degree in Engineering A LABEL FREE IMMUNOSENSOR FOR AFB1 BASED ON GOLD 3DNEEs WITH SPA ORIENTATION Candidate： Hu Haifeng Supervisor： Prof. Cao Lixin Academic Degree Applied for： Master of Engineering Speciality： Chemical Engineering and Technology Affiliation： School of Marine Science and Technology Date of Defence： June, 2015 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 摘 要 本文系统的综述了黄曲霉毒素电化学免疫传感器、纳米阵列电极以及修 饰电极 的研究现状 和进展。 采用模板法化学镀制 备出 金 三 维 纳 米 阵 列 电 极 （3DNEEs）。分别采用 PoPD 电聚合、半胱胺自组装以及蛋白 A 直接修饰三 种手段对 3DNEEs 进行了修饰，利用蛋白 A 的定向功能，构建了 AFB1 电化 学免疫传感器，对各种传感器组装及测试条件进行了优化，并对 AFB1 进行 了定量分析，得到了较好的检测结果。 采用循环伏安法制备 出聚邻苯二胺修饰 3DNEEs（PoPD/3DNEEs），并对 电聚合初期邻苯二胺的氧化进行了理论分析 ，结合聚合膜的红外表征结果， 表明实验制备的 PoPD 是苯胺型结构。利用蛋白 A 对抗体的定向固定作用， 构建了 AFB1 免疫传感器 BSA/Anti-AFB1/SpA/GA/PoPD/3DNEEs。对传感器 的组装过程进行了优化并对 AFB1 进行定量分析，结果表明该型传感器工作 区间为 4.0×10-11~8.0×10-9 g/mL，检测限达到了 3.4×10-12 g/mL（S/N=3）。较 其他研究者构建的相关传感器具有明显优势。 通过半胱胺在常规金电极和 3DNEEs 上的自组装，制备了半胱胺修饰电 极。构建了 BSA/Anti-AFB1/GA/Cys/MGE、BSA/Anti-AFB1/GA/Cys/3DNEEs 以及 BSA/Anti-AFB1/SpA/GA/Cys/3DNEEs 三种 AFB1 免疫传感器。对半胱胺 自组装时间、戊二醛交联时间、pH 值以及检测体系进行了优化，并对 AFB1 进行定量分析 。 阻 抗 谱 法得到的 检 测 限 分 别 为 2.0×10-11 g/mL（ S/N=3 ）、 9.0×10-12 g/mL （ S/N=3 ） 以及 1.4×10-11 g/mL （ S/N=3 ）； 方 波 伏 安 法 在 BSA/Anti-AFB1/GA/Cys/MGE 与 BSA/Anti-AFB1/SpA/GA/Cys/3DNEEs 上得 到了较好的检测结果 ，检测限分别为 6.5×10-11 g/mL（S/N=3）和 5.7×10-12 g/mL （S/N=3）。 在 3DNEEs 上直接修饰蛋白 A，制备了 SpA/3DNEEs。XPS 表征结果表 明蛋白 A 与 3DNEEs 之间生成 Au-S 键。基于该修饰电极，构建了 AFB1 免 疫传感器 BSA/Anti-AFB1/SpA/3DNEEs。对蛋白 A 固定时间以及抗体固定时 间进行了优化。定量分析结果表明 AFB1 浓度在 2.0×10-11~1.0×10-8 g/mL 范围 内，传感器的检测限达到了 1.9×10-11 g/mL（S/N=3）。 关键词：黄曲霉毒素 B1；三维纳米阵列电极；蛋白 A；化学修饰电极；免疫 传感器 - I - Abstract In this thesis, the research status and progress on aflatoxin electrochemical immunosensor, nanoelectrode ensembles and modified electrodes were summarized. The gold 3DNEEs was fabricated by an electroless procedure using polycarbonate membrane as the template. The three chemically modified