目的基因的发制备-基因文库法.pptVIP

基因组文库的质量评价和完备性 1.理论值 2.经验值 表 几种典型生物基因组文库大小与载体容量的关系 选择载体的主要参数是基因组大小 反转录合成单链cDNA 置换合成法合成cDNA第二链 引物-衔接头法合成cDNA第二链 cDNA文库的质量评价 1.文库的代表性 经验值计算 2.序列的完整性 cDNA文库的改良 1.均一化cDNA文库 基因组DNA饱和杂交法 2.二级复性动力学处理 全长cDNA文库 目的cDNA克隆的筛选和鉴定 cDNA文库与基因组文库的比较 cDNA文库的均一化，是指某一特定组织或细胞的所有表达基因均包含其中，且在cDNA文库中表达基因对应的cDNA的拷贝数相等或接近。均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来障碍的有效措施，有利于研究基因的表达和序列分析。 mRNA水平上，基因之间丰度差异极大； 基因组水平上，基因之间拷贝数差异不大，即基因在基因组上具有拷贝数相对一致的性质。 通过cDNA与基因组DNA饱和杂交降低高丰度mRNA在文库中高拷贝存在的cDNA的丰度。将随机打断的基因组总DNA片段标记为探针，与总cDNA单链饱和杂交，弃除未杂交的总cDNA，从cDNA-DNA杂交体上变性释放已均一化后的总cDNA，转化宿主。 二级复性动力学是指高丰度的cD